混合劑技術純化人外周血單核細胞
混合劑技術純化人外周血單核細胞?????????????????????????
試劑和器材：
1.?抗凝血劑：100mmol/L 乙二胺四乙酸或38g/L檸檬酸鈉；
2.?Hepes緩沖生理鹽水（HBS）：8.5g/L NaCl、10mmol/L Hepes-NaOH，pH7.4；
3.?OptiPrepTM；
4.?臺式低速離心機；
5.?巴斯德吸管（短型和長型）；
實驗方法：
1.?用乙二胺四乙酸（2mmol/L終濃度）或檸檬酸鈉（38g/L終濃度）作為抗凝劑來收集靜脈血；
2.?在合適的帶帽離心管（可容納5—10ml樣品的15ml管）中，全血與OptiPrepTM（分別為10倍體積和1.25倍體積）輕柔但徹底地混合（反復顛倒幾下）；
3.?在頂端加入約0.5ml Hepes緩沖生理鹽水，并且在20℃，1500g下離心30min；
4.?用緩慢減速程序或不制動的方法使轉子減速；
5.?從凹液面向下吸取外周血單核細胞直至距細胞沉淀約1cm處；
6.?用2倍體積的Hepes緩沖生理鹽水稀釋收集到的外周血單核細胞，再在250g—500g離心5—10min以沉淀細胞；
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