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單核細胞分離技術

2021.11.18

  (一)鐵粉吸附法

  1.材料及試劑

  (1)鐵粉或羰基鐵粉(Atomergic chemetals)99%的純度,顆粒小于60μm(Goodfellow Metals)。

  (2)強磁鐵(馬蹄形)。

  (3)一塊小棒狀磁鐵(約1cm長)。

  (4)毛細吸管等。

  2.操作方法

  (1)稱取一定量的鐵粉,一般為10g,用100ml生理鹽水洗滌4次,去除任何可溶性有毒物質。在倒去鹽水時,用強磁鐵吸住鐵粉。

  (2)用50ml生理鹽水混懸鐵粉。搖勻后,分裝于10個瓶中,包扎瓶口,121℃滅菌20min,拿出后立即輕輕搖勻,防止鐵粉結塊,儲藏備用。

  (3)臨用前,倒去瓶中的生理鹽水,加入適量的單個核細胞懸液(3ml~5ml,細胞總數為8×107個/瓶)。37℃溫育45min,中間不時晃動,使鐵粉懸浮起來。

  (4)加入一塊小磁鐵棒于瓶中,讓其吸住鐵粉以及附著在鐵粉上的細胞。

  (5)倒出懸液,此懸液主要是淋巴細胞,離心,收集。

  (6)在鐵粉瓶內倒入一定量的Hank’s液,用力振搖后,以強磁鐵吸附,幾分鐘后,倒出液體。

  (7)2 000r/min離心液體,管底即為單核細胞。

  (二)玻璃板吸附法

  將分離的單個核細胞傾于無菌潔凈的玻璃平皿內,置37℃ 30 min~40min,用毛細吸管輕輕吸取懸液,即為淋巴細胞。用適量的Hank’s液沖洗平皿,收獲即為單核細胞懸液。


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