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DMPK 專欄 | 同時定量阿比特龍、恩雜魯胺及其在人血漿中的主要代謝物的 LC-MS/MS 方法的開發(fā)和驗證
摘要
醋酸阿比特龍和恩雜魯胺是治療轉(zhuǎn)移性去勢抵抗性前列腺癌的兩種新藥。這些藥物的代謝很廣泛。主要代謝物是 N-去甲基恩雜魯胺、恩雜魯胺羧酸、阿比特龍 N-氧化物硫酸鹽和阿比特龍硫酸鹽；其中 N-去甲基恩雜魯胺據(jù)報道具有抗雄激素能力。一種用于同時定量阿比特龍、恩雜魯胺和主要代謝物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法已被開發(fā)和驗證，以支持治療藥物監(jiān)測。
關(guān)鍵詞：阿比特龍，恩雜魯胺，代謝物，N-去甲基恩雜魯胺，LC-MS/MS，治療藥物監(jiān)測；
＋
樣品信息
阿比特龍，恩雜魯胺，N-去甲基恩雜魯胺；
＋
實驗部分（儀器、試劑與材料）
1
主要儀器設(shè)備
三重四極桿質(zhì)譜儀 6500 (Sciex, Framingham, MA)
2
試劑材料
乙腈、甲醇（均為超梯度級）、水和甲酸（均為 LC-MS 級）。
二甲基亞砜 (DMSO)，K2EDTA 血漿。
3
樣品制備
從接受治療的患者獲得全靜脈血并在4℃以1800g離心5分鐘。分離上清液（血漿部分）并在-20℃儲存直至分析。樣品在處理前解凍，將 50 μL 等分試樣轉(zhuǎn)移到琥珀色的 1.5 mL 容器中。向每個樣品中加入體積為 15 μL 的 IS 工作溶液。用 150 μL乙腈沉淀蛋白質(zhì)，然后將樣品渦旋、搖動（在 11,300g 下 10 分鐘）和離心（在 23,100g 下在 208C 下 10 分鐘）。將 100 μL的上清液轉(zhuǎn)移到 1.5-mL 管中，并用 100-μL 水（LC-MS 級）稀釋。將最終提取物轉(zhuǎn)移到琥珀色玻璃自動進樣器瓶中。
4
LC-MS/MS色譜條件
色譜柱： Kinetex C18 column (150 *2.1 mm, particle size 2.6 μm, Phenomenex)
流動相A：0.1%甲酸水溶液；
流動相B：0.1%甲酸甲醇溶液；
流速：300 μL/min；
柱溫：40 ℃；
進樣量：20 μL；
流動相梯度：見表1
表1 流動相梯度表
時間 (min)
A%B%0703027030
2.01
307073070
7.01
05100
100
＋
實驗結(jié)果
圖1 恩雜魯胺 (1A)、N-去甲基恩雜魯胺 (1B)、恩雜魯胺羧酸 (1C)、阿比特龍 (2A)、阿比特龍 N-氧化物硫酸鹽 (2B) 和阿比特龍硫酸鹽 (2C) 的分子結(jié)構(gòu)和可能片段化。母離子 m/z (+H) 分別為 465.0、451.1、452.1、350.1、446.0 和 430.0。
圖2 恩雜魯胺（1A）、N-去甲基恩雜魯胺（1B）、恩雜魯胺羧酸（附加峰屬于恩雜魯胺羧酸，第一個峰對應(yīng)于N-去甲基恩雜魯胺）（1C）、阿比特龍（ 2A)、阿比特龍 N-氧化物硫酸鹽 (2B)、阿比特龍硫酸鹽 (2C) 和 ISs 2H6-恩雜魯胺 (3A)、2H6-N-去甲基恩雜魯胺 (3B) 和 2H4-阿比特龍 (3C)
表2 在 LLOQ、中濃度和高濃度下測試的阿比特龍、恩雜魯胺和兩種主要代謝物在人血漿中的檢測性能數(shù)據(jù)
表3 10 名接受阿比特龍 (1000 mg/d) 或恩雜魯胺?(160 mg/d) 的患者的平均穩(wěn)態(tài)血漿濃度和范圍
結(jié)論：
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開發(fā)并驗證了一種 LC-MS/MS 方法，用于同時分析阿比特龍、恩雜魯胺、N-去甲基恩雜魯胺、恩雜魯胺羧酸、阿比特龍 N-氧化物硫酸鹽和阿比特龍硫酸鹽。由于阿比特龍 N-氧化物硫酸鹽和恩雜魯胺羧酸在 DMSO 中的穩(wěn)定性低，工作溶液在血漿中用新制備的儲備溶液制備。阿比特龍的濃度范圍為 1–100 ng/mL，恩雜魯胺和恩雜魯胺羧酸的濃度范圍為 5–500 ng/mL，N-去甲基恩雜魯胺的濃度范圍為 10–1000 ng/mL，阿比特龍 N-氧化物硫酸鹽的濃度范圍為 30–3000 ng/mL， 選擇 100–10,000 ng/mL 的硫酸阿比特龍來測量患者穩(wěn)態(tài)血漿中的化合物濃度。這些分析物的聯(lián)合測定提供了一種測量血漿濃度的有效方法。該測定現(xiàn)已成功實施，以促進對阿比特龍、恩雜魯胺和兩種主要代謝物的治療藥物監(jiān)測。
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