分享至
Premier SEC，抗體分析平臺的優質之選
隨著抗體藥物研發的深入，對聚合物分析的要求越來越高，市場迫切需求更高性能的SEC技術，解決分離問題，并滿足這一方法的特定要求：
既能高效分離聚合物，同時也要保證碎片的準確定量；
能分析傳統單抗，對雙抗和ADC等新結構也能得到滿意的分離；
減少對鹽的依賴，使SEC方法更耐用，也提高了SEC MS分析的靈敏度；
減少對pH的依賴，使SEC方法更耐用，方法更有助于抗體制劑的評估；
批次重新性有保證，即開發的方法可以用于整個方法生命周期；
多種粒徑，以便實現無縫轉移，同時滿足常規分析和提速需求。
最新推出的Premier SEC色譜柱，可分離絕大部分樣品，而且也僅需一種流動相，因此可以作為平臺方法的首選。下面，我們將從這些角度出發，分析Premier SEC作為抗體分析平臺的可行性。
01
Premier SEC的分離能力
圖1. Premier SEC產品示意圖
Premier SEC采用全新羥基化聚環氧乙烷鍵合相，減少ADC與填料的疏水相互作用。方法開發時，即便不加異丙醇，仍可得到對稱的色譜峰（
填料孔徑擴大到250?，以提高雙抗和融合蛋白等新結構的分離性能，使聚合物和片段的分離度明顯提高（
繼續提升單抗的分析性能，對四個上市單抗藥物的分析表明，Premier SEC對單抗的聚合物和片段都有更高的分離能力，而且符合美藥典專論對單抗分析的要求（
圖2. Premier SEC分離四種上市抗體藥物。
因此，抗體項目的聚集體分析表明，Premier SEC是很好的平臺化技術，可滿足大多數項目的分離需求，減少色譜柱選擇的工作量，提高了方法開發效率。
圖3. Premier SEC分析單抗、ADC和融合蛋白的色譜圖。
02
Premier SEC減少對流動相的依賴
Premier SEC的創新點之一，在于采用HPS高性能表面技術，將不銹鋼金屬離子和待測蛋白隔離開，從而減少拖尾的風險。與傳統不銹鋼色譜柱相比，開發方法時，僅需較低的鹽濃度，就可以得到對稱的峰形。
圖4. 不同品牌色譜柱各種鹽濃度的SEC色譜圖。
這一技術也降低了SEC分析對pH的依賴，在較寬的pH范圍內，抗體始終保持對稱的峰形。
圖5. 流動相pH對Premier SEC和傳統色譜柱峰形的影響。
Premier SEC的這一特色，給SEC方法開發和驗證帶來了極大的方便；
色譜柱的低吸附，使SEC方法的靈敏度提高，檢出限增加了5倍以上。
圖6. Premier SEC及不銹鋼管SEC的抗體檢出限色譜圖。
這一性能的提高，有助于聚合物的檢出，新色譜柱也不會需要反復老化。而鹽濃度的減少，可以增強SEC MS的信號強度，從而提高了方法的可信度；
流動相鹽濃度最低可以到50 mM，方法開發將更簡單，運行更穩定。還可以采用接近生理鹽水濃度的流動相，使數據能真實反應體內給藥情境，更有參比意義；
流動相減少對pH值得依賴，意味著可以采用酸性流動相。有些抗體制劑pH偏酸，采用酸性流動相，SEC數據將更有助于評估制劑的穩定性。
圖7. 不同流動相條件下Premier SEC分析曲妥珠的色譜圖。
03
Premier SEC的重現性
Premier SEC采用專門的抗體標準品進行放行控制，對每根色譜柱進行檢測后，基本上消除了批次差異的可能性。
圖8. 不同流動相條件下7根色譜柱的重現性色譜圖。
04
Premier SEC的方法轉換
Premier SEC有兩種粒徑，即1.7 μm和2.5 μm，可用于HPLC和UPLC分析，同時滿足常規分析和提速的不同需求。
圖9. 兩種粒徑Premier SEC(1.7/2.5 μm)分析單抗標準品色譜圖。
從上圖可以看出，Premier SEC的兩種粒徑得到的色譜圖，分離效果所對應的兩種數據幾乎完全一致。
綜上所述，Premier SEC作為第二代技術，性能得到了全面提升。柱管技術和填料技術提高了SEC的分離性能，色譜柱的通用性明顯增強，是現代抗體分析的首選，作為研發的平臺化方案可行性很高。
