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TSKgel色譜柱在寡核苷酸分析中的選擇與應用
治療性寡核苷酸是由固相化學合成工藝生產。在合成過程中會產生工藝相關雜質和產品相關雜質。產品相關雜質包含許多目標產物的類似物（分子量的差別：堿基數N-1、N、N+1等），磷酸基S化等的不對稱化合物、異構體等。因此，雜質的分析監控對工藝和質量控制就顯得十分重要。
液相色譜技術具有樣品適用范圍廣、分離效率高、速度快等特點，已成為核酸藥物生產與質控分析必不可少的重要手段。本期內容將介紹TSKgel色譜柱在寡核苷酸分析中的選擇與應用。
01
寡核苷酸的HPLC分離模式
下表中列舉了寡核苷酸HPLC分析的幾種分離模式及適用的分離條件。也可以通過連用MS進行檢測。
02
寡核苷酸的純度檢驗
在離子交換色譜柱中，可以對離子基團與主成分有一處不同的化合物進行分離，比如能夠分離n-1、n、n+1的化合物。下圖是TSKgel DNA-NPR陽離子交換色譜柱對13個堿基的硫代磷酸寡核苷酸粗樣分析的色譜圖。
下圖是TSKgel DNA-STAT色譜柱對粗制的寡核苷酸與純化后的樣品進行純度評估。
03
不同堿基數寡核苷酸的分析
在寡核苷酸的分析中，尺寸排阻分離模式是基于堿基數量、磷酸基不同導致的分子量差別進行分離，通常用于簡單的質量控制或純度研究。該模式的優點是可以使用接近生理條件的洗脫溶液進行等度分離。有時也會添加水溶性有機溶劑來抑制疏水吸附。
下圖是采用兩根串聯的SEC色譜柱TSKgel UP-SW2000來區分長度相差一個堿基的寡核苷酸混合物 (20-mer和N-1 19-mer)。
04
脂質體包被的siRNA的SEC分離
下圖是使用TSKgel SuperSW2000色譜柱對天然型DNA核酸藥物Defitelio進行質量分析的示例。
參考文獻：Handbook of analysis of oligonucleotides and related Products, Feb.23 (2011) 125, Edited by J.V. Bonilla et al.
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