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QSight LC-MS/MS應(yīng)對化妝品中63種激素測定解決方案
引言
隨著人們生活水平的不斷提高，大家對化妝品的使用需求和要求也在逐漸提高，并且隨著網(wǎng)絡(luò)代購的快速發(fā)展，各種歐美、日本、韓國等不同國家不同功效的化妝品逐漸走進人們的視野，其安全性也為廣大消費者所關(guān)注，化妝品中所添加的化學(xué)物質(zhì)對人體健康具有潛在的危害，其中糖皮質(zhì)激素外用可降低毛細血管的通透性，減少滲出和細胞浸潤，具有抗炎、抗過敏、免疫抑制等多種作用，長期使用易導(dǎo)致皮膚變薄、發(fā)紅、發(fā)癢，甚至出現(xiàn)血糖升高、骨質(zhì)疏松、胎兒畸形、免疫功能下降等現(xiàn)象，短期使用雌激素、雄激素、孕激素等性激素可使皮膚保濕，回復(fù)彈性，減少皺紋，但長期使用含有性激素的化妝品會導(dǎo)致色素沉積，皮膚萎縮變薄，甚至具有致癌性。
2022年3月31日，中國食品藥品檢定研究院發(fā)布了關(guān)于公開征求《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》修訂意見的通知，將化妝品中曲安西龍等63種激素類原料定義為原料，并在《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015版)的基礎(chǔ)上對部分數(shù)據(jù)做了調(diào)整。本文采用QSight LC-MS/MS聯(lián)用系統(tǒng)對化妝品中的63種激素原料進行定性定量分析，其定量限完全滿足標準及相應(yīng)的技術(shù)規(guī)范檢測需求，輕松應(yīng)對日常檢測分析要求。
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實驗方法
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樣品處理：
膏霜乳液類、液態(tài)水基類、凝膠類、面膜類樣品
稱取樣品0.2g（精確到0.001g），置于10mL具塞比色管中，加入少量乙腈（3:1），在渦旋混合儀上震蕩30s至試樣與提取溶劑混合均勻，然后加入乙腈至近刻度，超聲提取20min，靜置至室溫，用乙腈（3:1）定容至刻度，搖勻，以4000r/min離心10min，濾過（必要時取上清液適量用50%乙腈溶液稀釋，稀釋液經(jīng)0.22μm濾膜過濾），濾液作為待測溶液。
液態(tài)油基類
稱取樣品0.2g（精確至0.001g），置于離心管中，加入2mL正己烷，在渦旋混合儀上分散，然后加入70%乙腈3mL，渦旋震蕩2min，4000r/min ,離心10min，吸取下層溶液至10mL比色管中，上層正己烷層用70%乙腈3mL，自“渦旋震蕩2min，…”起，重復(fù)上述步驟一次，合并兩次溶液，加50%乙腈定容至刻度，濾過（必要時用適量50%乙腈溶液稀釋，稀釋液經(jīng)0.22μm濾膜過濾），濾液作為待測液。
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LC-MS/MS儀器方法
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珀金埃爾默 LX50 UHPLC參數(shù)：
色譜柱：Shim-pack XR-ODSIII 2.0mm× 150 mm , 2.2 μm
柱溫：35℃
流速：0.3 mL/min
進樣量：10 μL
質(zhì)譜參數(shù)：
儀器采用珀金埃爾默 QSight 420? 三重四極桿質(zhì)譜儀，離子源參數(shù)及目標原料質(zhì)譜參數(shù)見文末解決方案原文件。
QSight三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀具有自清潔功能的專利設(shè)計，減少對日常維護的需求。與其他質(zhì)譜產(chǎn)品相比，可獲得更多的儀器運行時間（35天/年）。采用雙離子源的設(shè)計，避免了多路聯(lián)用方法開發(fā)的復(fù)雜性，擁有更短的樣品運行時間，從而提高了生產(chǎn)效率。同時，利用真空壓力差產(chǎn)生層流傳輸離子，具有更好的靈敏度和系統(tǒng)穩(wěn)定性，另外樣品制備簡單，可以獲得更高的重現(xiàn)性。
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結(jié)果與討論
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本方法采用一針進樣，通過Time Managed MRM正負切換模式同時測定63種激素類原料，其中59種原料采用正離子模式采集，4種原料采用負離子模式采集。圖1中展示了63種原料部分MRM譜圖。各個原料的峰型對稱，并獲得優(yōu)異的色譜分離效果，保證每個色譜峰上有足夠的采集點數(shù)，以便獲得準確的結(jié)果及優(yōu)異的重復(fù)性。
圖1 63種激素類原料的部分MRM譜圖（2ng/ml）
采用50%的乙腈溶液將63種激素類標準品混合溶液稀釋成0.6ng/mL?60 ng/mL的系列校準標準溶液，并繪制標準曲線，采用外標法進行定量分析。圖2為隨機挑選的不同流出時間時的原料的標準曲線情況。其中各個原料在線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系均較好，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.99。考察了10ng/ml濃度下的加標回收率和6針的重現(xiàn)性測試（見表1），實驗結(jié)果表明，該方法具有良好的回收率和重現(xiàn)性，完全滿足化妝品中激素類原料的日常檢測分析。
圖2 不同流出時間原料色譜圖的采集點數(shù)情況示例
表1 63種原料的部分回收率、重現(xiàn)性及檢出限數(shù)據(jù)
圖3 4個原料的線性情況示例
4結(jié)論●
本文采用LX50 UHPLC-QSight 420三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)建立了快速，高靈敏度和可靠的LC-MS/MS實驗方法測定化妝品中63種激素原料，一針進樣，正負切換同時檢測，為化妝品中的激素測定提供了可靠的高通量檢測手段，且檢出限遠遠低于《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》中的檢出限要求，同時數(shù)據(jù)顯示，其重復(fù)性和線性均較好，為后期高通量樣品的測定提供可靠的保障。
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