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No.178｜2020版藥典第一部 地黃飲片和熟地黃中地黃苷D的分析
大阪曹達｜三耀精細
?第178條推送 ??每周五17:00準時更新
客戶向我們提供了地黃苷D標準品溶液（液體）、地黃飲片和熟地黃（固體粉末）。希望本實驗室能夠按照2020版《中國藥典》中分析方法，篩選合適的色譜，使地黃飲片和熟地黃中地黃苷D與其前后相鄰雜質之間的分離度能夠達到基線分離，同時，地黃苷D峰的理論塔板數應滿足藥典要求（不低于5000）。
我們按照2020版《中國藥典》熟地黃含量測定項下方法，對地黃飲片和熟地黃進行了提取處理，然后按照藥典方法，
在CAPCELL PAK C18 MGII色譜柱上得到了良好的分析結果。
首先，下圖為使用CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色譜柱，對地黃苷D標準品的分析結果。
HPLC Conditions ：
色譜柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d.×250 mm
流動相：0.1%磷酸/甲醇 = 95/5
流? ?速：1.0 mL/min
溫? ?度：35°C
檢? ?測：UV 203 nm
濃? ?度：客戶提供
進樣量：10 μL
結果中，地黃苷D的保留時間為28.135 min，理論塔板數為13067，滿足藥典不低于5000的要求，峰不對稱因子為1.00，峰形良好。
隨后，我們使用同樣方法對熟地黃和地黃飲片的實際樣品進行了分析，結果如下圖所示：
HPLC Conditions ：
色譜柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d.×250 mm
流動相：0.1%磷酸/甲醇 = 95/5
流? ?速：1.0 mL/min
溫? ?度：35 °C
檢? ?測：UV 203 nm
濃? ?度：樣品按藥典方法處理
進樣量：10 μL
地黃飲片中地黃苷D與其前后相鄰雜質之間的分離度分別為1.52和1.88，熟地黃中地黃苷D與其前后相鄰雜質之間的分離度分別為1.65和1.89，均可以得到基線分離。
然而從上面實際樣品的結果可以看到，地黃飲片樣品中地黃苷D與其前相鄰雜質之間的分離度僅為1.52，剛剛達到基線分離，為了使其得到更好的分離，我們嘗試對柱溫進行調整，分別在30℃和40℃對地黃飲片進行分析，結果如下面兩張圖所示：
HPLC Conditions ：
色譜柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d.×250 mm
流動相：0.1%磷酸/甲醇 = 95/5
流? ?速：1.0 mL/min
溫? ?度：30°C / 40°C
檢? ?測：UV 203 nm
濃? ?度：樣品按藥典方法處理
進樣量：10 μL
在30℃柱溫下，地黃苷D與其前后相鄰雜質之間的分離度分別為3.25和1.88，能夠得到良好的分離。在40℃柱溫下，地黃苷D與其前后相鄰雜質之間的分離度分別為0.90和1.66，地黃苷D與其前雜質未能達到基線分離，升溫不利于分離。
針對藥典中地黃飲片和熟地黃中地黃苷D的分析，我們總結了以下注意事項：
(1). 由于中藥樣品中成分比較復雜，在不同色譜柱上的分離情況差異比較大，建議客戶在分析時，可根據具體分離情況，對有機相比例及柱溫進行調整，以得到良好的分離。
(2). 地黃飲片及熟地黃中均含有疏水性較大的物質，我們進行80min的洗脫后，仍可能有疏水性物質未得到洗脫，建議客戶使用高有機相進行沖洗。
綜上所述，使用CAPCELL PAK C18 MGII色譜柱，按照2020版《中國藥典》熟地黃含量測定項下方法，能夠得到滿足藥典分離度和理論塔板數要求的分析結果。
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