【應(yīng)用分享】全自動固相萃取-液質(zhì)法對豬肉中四環(huán)素的檢測方法

Meizheng美正

2022.6.09

本應(yīng)用參照GB/T 21317-2007，采用ASPE720全自動固相萃取儀結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）建立了豬肉中四環(huán)素的檢測方法。樣品經(jīng)Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取，PolyPlus HLB-2小柱凈化，Kinetex F5色譜柱分析，外標(biāo)法進行定量。結(jié)果表明，當(dāng)四環(huán)素類添加水平為10 μg/kg時，使用ASPE720全自動固相萃取儀凈化，回收率均在75% ~ 100%，RSD小于15%，能夠滿足檢測要求。

“1

ASPE720

全自動固相萃取儀

“2

前處理耗材?? ?

? ? ? ?

儀器、試劑與材料

1、主要儀器設(shè)備

PerkinElmer QSight液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀；

ASPE720全自動固相萃取儀。

2、試劑材料

甲醇、乙酸乙酯為色譜純；

乙二胺四乙酸二鈉、檸檬酸、磷酸氫二鈉、乙酸鉛為分析純；

四環(huán)素類混合標(biāo)準(zhǔn)品：用水：乙腈 = 3:1的溶液稀釋；

檸檬酸溶液：0.1 mol/L。稱取21.01 g檸檬酸，用水溶解，定容至1000 mL。

磷酸氫二鈉溶液：0.2 mol/L。稱取28.41 g磷酸氫二鈉用水溶解，定容至1000 mL。

Mcllvaine緩沖溶液：將1000 mL 0.1 mol/L檸檬酸溶液與625 mL 0.2 mol/L 磷酸氫二鈉溶液混合。

Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液：0.1 mol/L。稱取60.5 g乙二胺四乙酸二鈉放入1625 mL Mcllvaine緩沖溶液中，使其溶解，混勻后調(diào)節(jié)pH至4.0 ± 0.05。

甲醇 + 水（1 + 19 ）溶液：取10 mL甲醇與190 mL水混合。

甲醇+乙酸乙酯（1 + 9）溶液：取20 mL甲醇與180 mL乙酸乙酯混合。

PolyPlus HLB-2小柱：150 mg / 6 mL，P/N：CSS0146。

樣品制備

1、樣品提取

稱取均質(zhì)豬肉5 g，置于50 mL離心管內(nèi)，分別用20 mL、15 mL、10 mL Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液進行提取，每次渦旋混合1 min，冰水浴超聲10 min三次，10℃，3000 r/min離心5 min，合并上清液，并定容至50 mL，混勻，10℃，5000 r/min離心10 min，移取10 mL上清液轉(zhuǎn)移至固相萃取儀標(biāo)配的上樣管中待凈化。

2、樣品凈化

將HLB-2小柱放置于全自動固相萃取儀的SPE柱支架上，再將標(biāo)配收集管放置于收集架上，按照表2的指令設(shè)置方法，啟動儀器，由儀器自動完成凈化步驟。

注：淋洗指令后的常規(guī)樣品指令目的為吹干SPE小柱。

3、后處理

將洗脫液于35℃下用氮氣濃縮至干，用1 mL初始流動相定容，渦旋震蕩1 min，過0.22 μm Nylon濾膜，LC-MS/MS待測。

色譜條件

色譜柱：Kinetex F5，2.6 μm，3.0 × 50 mm ；

流動相A：2 mM醋酸銨（含0.1%甲酸）；

流動相B：甲醇；

柱??溫：35℃；

進樣量：5 μL；

梯度洗脫見下表。

離子源：ESI+；霧化氣溫度：220℃；電噴霧電壓：4800 V；離子源溫度：300℃；反吹氣溫度：100℃；質(zhì)譜接口溫度：250℃；采集方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。

注：本實驗中所有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)都以第一組離子對作為定量離子對。

實驗結(jié)果

實驗譜圖

圖 1. 10?ng/mL四環(huán)素類混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液色譜圖

圖 2. 10?ng/mL四環(huán)素類基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液色譜圖

圖 3.?豬肉基質(zhì)空白色譜圖

圖4.?10?μg/kg豬肉基質(zhì)加標(biāo)色譜圖

實驗結(jié)論

本實驗采用ASPE720全自動固相萃取儀建立了豬肉中四環(huán)素類的前處理方法，并結(jié)合LC-MS/MS對豬肉中四環(huán)素類的含量進行了測定。對于加標(biāo)量為10 μg/kg的豬肉樣品，回收率在75% ~ 100%之間，RSD小于15%，符合實驗要求，且方法穩(wěn)定，說明ASPE720全自動固相萃取儀適用于此實驗操作。