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告別乳化，ISOLUTE? SLE+固相支撐液液萃取
液液萃取（Liquid Liquid Extraction,?LLE）是樣本前處理的經典方法之一，該方法具有方法開發難度低、操作簡單、適用性廣等特點。但在實際操作中，也存在著回收率低、重現性差、自動化處理難度高等缺陷。特別是對于生物檢材，樣本中含有大量具有表面活性特性的物質，在液液萃取過程中極易形成乳化層，增加操作難度的同時也降低了目標化合物的回收率。
圖1.?人血清用庚烷萃取時形成的乳化層
圖1所示為400 μL庚烷與100 μL人血清進行液液萃取時形成的乳化層。如圖所示，紅色標記部分的乳化層占據了樣本體積的絕大部分。
ISOLUTE? SLE+固相支撐液液萃取（Supported Liquid Extraction, SLE）產品使用改性的硅藻土做為填料，水性的樣本吸附于填料微孔中形成不會移動的微液滴層，當不親水的有機溶劑流經填料表面時，溶劑與樣本之間形成連續的濃度差，使目標分析物被高效率萃取到溶劑中。整個過程完全模擬了傳統液液萃取的過程，并且能夠得到更好的回收率和重現性。
圖2. ISOLUTE? SLE+工作原理示意圖
下面我們通過一個小實驗，簡單演示ISOLUTE? SLE+固相支撐液液萃取的實驗效果。
實驗材料包括：牛奶，ISOLUTE??SLE+小柱，脂溶性色素透明綠，水溶性色素誘惑紅。
圖3.?實驗材料：牛奶，ISOLUTE??SLE+小柱，
脂溶性色素透明綠，水溶性色素誘惑紅
牛奶中含有大量的蛋白質和磷脂，在液液萃取的過程中非常容易形成乳化層，影響實驗結果的準確性。染色后的牛奶樣品如圖4。
圖4.染色后的牛奶樣本
LLE實驗取400 μL染色的牛奶與1 mL MTBE混合；SLE實驗取400 μL 樣本用1 mL MTBE進行萃取。萃取后結果如圖5。
圖5. 染色后牛奶樣本分別進行LLE和SLE后的樣品狀態；
A:?LLE；B:?SLE
如圖5A所示，在液液萃取過程中，溶劑和樣本交界處形成了顏色不均一的乳化層，很難將萃取溶劑完全吸出，必須通過多次萃取才能得到較好的回收。圖5B，通過SLE進行萃取后，樣本及水溶性紅色顏料全部保留在小柱內，萃取液清澈透明，沒有乳化或分層。
對比兩瓶萃取液的顏色，可明顯看出在相同的溶劑條件下，通過SLE萃取的樣本顏色更深，萃取效率更高（圖6）。
圖6. SLE和LLE萃取液比較
對于血液樣本，在液液萃取的過程中難免有部分磷脂成分被溶劑共溶出。磷脂分子具有兩親性的活性基團，會在液質系統內殘留，改變色譜峰形、增加色譜柱壓力、抑制分析物離子化效率。圖7為分別使用LLE和SLE萃取血清中脂溶性維生素時，樣品中磷脂成分的信號響應圖，在3.1分鐘時，LLE方法有磷脂峰，信號強度是SLE方法的5倍左右。
圖7. LLE和SLE萃取血清中脂溶性維生素，樣品中的磷脂信號響應
結論
通過以上的實驗結果我們可以看出，ISOLUTE??SLE+可完全替代實驗室傳統的液液萃取，方法開發簡單，消除了乳化現象，方法重現性好、操作簡便、回收率高、易于自動化，是實現實驗室高通量、高質量樣本處理的有力工具。
Biotage提供96孔板和小柱形式的SLE耗材，規格從200 μL至10 mL樣本量，可滿足多種檢測行業的需求。配合使用Biotage? Extrahera??全自動前處理平臺可在30 分鐘左右完成96個樣本的前處理，極大地提高實驗室的樣品處理效率。
相關裝置和耗材
產品名稱和描述
訂貨號
ISOLUTE SLE+ 200 μL Plate
820-0200-P01
ISOLUTE SLE+ 400 μL Plate
820-0400-P01
ISOLUTE SLE+ 400 μL?Columns
820-0055-BG
ISOLUTE SLE+ 1 mL?Columns
820-0140-CG
ISOLUTE SLE+ 2 mL Columns
820-0290-D
ISOLUTE SLE+ 5 mL Columns
820-0690-E
ISOLUTE SLE+ 10 mL Columns
820-1420-F
Biotage? 96位正壓萃取裝置
PPM-96
Biotage? ?Extrahera?高通量全自動樣品前處理系統
414001
TurboVap? 96?Dual多功能全自動樣品濃縮儀
418000
關于Biotage
Biotage（BIOT, NASDAQStockholm）是一家致力于解決社會問題的全球影響力科技公司。我們為藥物發現和開發、分析測試以及水和環境檢測方面的客戶提供工作流程解決方案和產品。作為全球專業的樣品前處理方案提供者和行業領先者，Biotage為樣品分析前處理提供專業的自動化處理平臺、耗材以及方法開發，如Extrahera?全自動樣品前處理系統、TurboVap?全自動氮吹濃縮儀、ISOLUTE?和EVOLUTE?樣品前處理耗材等，幫助我們的用戶提高工作效率的同時也顯著改善了生物樣品分析實驗的數據質量。
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