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天美講堂丨未知熒光樣品測試小指南
熒光光譜是一種廣泛應用的分析技術，但測試未知樣品熒光光譜即使對相對有經驗的用戶來講也往往一種挑戰。
下面是關于熒光光譜測量的步驟，是一篇新手友好型的操作小指南！面對未知樣品，沒有操作經驗的伙伴兒們也能從容測試哦！
當測量未知樣品的熒光時，首先最好先測量一下樣品的吸光度。?熒光與吸收光成正比，因此可以確定最大吸收波長。?愛丁堡穩態瞬態熒光光譜儀FLS1000或FS5型號，均能夠實現吸光度和熒光測試功能。在實際測試時，由于有些樣品的激發光譜和發射光譜之間可能存在一些重疊。因此，通常可以選擇一個比這個最大吸收波長位置更短的波長作為激發波長。?
下面這個樣品的實例是使用FS5 測試蒽環己烷溶液中的吸收光譜。最大吸收值大約為0.1, 通常為避免內濾效應（天美分析帖子中有講過哦：熒光測試技巧之避免內濾效應）。我們將溶液濃度控制在0.1以下。在此基礎上，可以將蒽環己烷溶液樣品的激發波長設置為~355 nm或~375 nm。??
在FS5上測試的蒽環己烷溶液的吸收光譜圖
接下來，?激發和發射波長可以進行調整，以最大限度地提高感興趣的信號。同時可以調節激發和發射側單色器狹縫，從而讓更多的光通過。需要注意是，增加狹縫獲取更高信號的同時，會降低光譜分辨率(即光譜線的分辨率)。測試時增加信號強度cps，以獲得良好的信噪比，但應低于探測器飽和極限: 標準PMT檢測器的飽和極限是150萬cps。當單位時間內過多的光子照射至探測器時，將使測試數據失真，測試譜圖扭曲；甚至有可能損壞檢測器。
當測試條件優化好后，可以在光譜儀軟件中進行測試參數的設置。愛丁堡光譜儀的測試窗口可以進行波長范圍Scan range、步進step、停留時間Dwell time和重復次數Number of scans等參數。如下面測試窗口所示。停留時間（在每個測試步進點下的積分時間）和掃描次數對總采集時間有貢獻。顯然，更長的集成時間將提高數據的質量。同時，背景扣除和校正文件的選項也可以在對話框中進行勾選使用。
儀器軟件在獲取數據時繪制數據圖，生成如下圖所示的熒光光譜。
面對未知樣品，熒光測試是不是沒有想象中的那么難，你學會了嗎？
