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如有神“柱” | 結構相似很難分離？有了它輕松搞定
在日常色譜分析實驗過程中，
您有沒有遇到過結構相似化合物的分離難題？
通常是如何解決的呢？
今天小編就給大家介紹一件神秘武器
——Ascentis? Express F5色譜柱。
Ascentis? Express F5 U/HPLC色譜柱填充穩定的五氟苯基丙基反相固定相，由于存在負電性的氟，其苯環缺電子，除π-π和溫和的立體作用力外，五氟苯基固定相還可通過極性相互作用對化合物進行保留。具備極性和非極性特性，五氟苯基固定相表現出雙模式保留行為，依據流動相中乙腈含量的函數得到一種“U 形” 保留行為，即保留會在低和高濃度乙腈（反相和HILIC 保留模式）下均有所提高。Ascentis? Express F5適用于堿性、酸性或中性化合物分析，并可提供相對C18的正交選擇性。
Ascentis? Express F5參數
硅膠：
B型（高純度硅膠）
填料類型：
表面多孔顆粒（SPP）
固定相：
五氟苯基丙基硅烷
粒徑：
2.0 μm / 2.7 μm / 5.0 μm
孔徑：
90 ?
碳載量：
5.3% / 5.5% / 3.9%
表面積：
120 m2/g / 135 m2/g / 90 m2/g
pH范圍：
2 - 9
低pH時的最高溫度：
60 °C
高pH時的最高溫度：
40 °C
封端：
是
相比于C18，F5 表現出更強的堿性化合物保留和更低疏水性化合物保留
適用于正相、HILIC 和純水相應用
固定相穩定，柱流失低
結構接近的化合物的分析
氫化可的松和潑尼松龍結構相似，僅有一個雙鍵之差。雖然它們溶解度接近，形狀差異卻十分顯著。下面這個應用實例展示了使用C18和F5固定相對它們（包括潑尼松內標（IS））進行分離的結果對比。顯然，由于增強的立體選擇性，五氟苯基相可以對這些結構類似的化合物進行分離。
色譜條件
色譜柱：
Ascentis? Express F5，10 cm x 4.6 mm, 2.7 μm（53590-U）
Ascentis? Express C18, 10 cm x 4.6 mm, 2.7 μm (53827-U)
流動相：
[A] 水；[B] 甲醇
流動相比例：
A:B 50:50, v/v
流速：
0.8 mL/min
溫度：
35 °C
系統壓力：
2400 psi
檢測器：
紫外 波長240 nm
進樣量：
5 μL
樣品：
溶于10%甲醇水溶液，每種10 μg/mL
在反相和HILIC模式下
對司來吉蘭和苯丙胺的分離
HILIC是多模式保留機理，可提供與反相機理正交的選擇性，Ascentis? Express F5 對司來吉蘭和苯丙胺的色譜分離結果可證明此點。司來吉蘭在HILIC條件下會最后發生洗脫，但在反相條件下則會首先發生洗脫。因此，司來吉蘭主要通過RP分配作用進行保留，而苯丙胺主要通過離子交換保留。
色譜條件
色譜柱：
Ascentis? Express F5, 10 cm x 4.6 mm I.D., 2.7 μm (53590-U)
流動相：
[A] 10 mM乙酸銨，pH 4.0，含乙酸；[B] 乙腈；（20:80, A:B - HILIC），（40:60，A:B - 反相）
流速：
0.6 mL/min
壓力：
260 bar (2300 psi)
溫度：
35 °C
檢測器：
MS ESI (+), SIR m/z 136, 150, 188
進樣體積：
2 μL
樣品：
溶于甲醇，10 μg/mL
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