RNA質量不好 請問能繼續(xù)做定量PCR嗎
RNA質量不好?請問能繼續(xù)做定量PCR
1.其實反轉錄要求不是很高,所有器具消毒操作帶手套口罩就行,沒必要加RNaseInhibitor
2.OD260/280實際上反應的是蛋白質雜質的比例,可以間接的反應有沒有RNA酶污染,所以這個比值低了有可能是RNA酶污染,也可能是提取操作或者試劑問題導致蛋白質殘留過多.
做普通跑膠比值要求高一些在1.80-2.20之間；如果做實時定量要求就會低很多,1.5我都做過,影響不是很大,總量少不怕,就怕有差異,關鍵是點樣不容易均一,因為實時定量非常敏感,很小的差異都會放大N倍,一般就靠增大總反應體積來減少誤差,30-50微升的時候由操作帶來的誤差會大大減少,而很多人用的10微升體系做10次能有2次正常結果就不錯了.
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