雙鏈RNA病毒的復制
雖然同為雙鏈核酸分子,但雙鏈RNA的復制方式和雙鏈DNA不同,雙鏈RNA不是半保留復制,而是全保留復制,復制需要經過mRNA中間體。雙鏈RNA病毒有兩個特點,一是它的基因組為10-12條雙鏈RNA分子;二是它有多層衣殼,而沒有囊膜。病毒的RNA-RNA 聚合酶存在于髓核中,在該聚合酶的作用下病毒雙鏈RNA基因組轉錄正鏈RNA,它們自髓核逸出。它們既能作為mRNA,又能作為病毒基因組的模板。mRNA翻譯結構蛋白,裝配內層衣殼后,正鏈RNA進入,并形成雙鏈RNA。然后又重復上述過程,最后獲得了外層衣殼。
綜上所述,病毒復制的特點表現在:一是利用寄主細胞的物質和能量進行病毒生物大分子的合成;二是復制周期短,繁殖效率高;三是反轉錄病毒的復制方式,豐富了遺傳信息傳遞的中心法則。
在動物正鏈RNA病毒的研究上,1996年,Meyers G等構建了豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)基因組全長cDNA克隆,將cDNA克隆體外轉錄后獲得的RNA轉染豬腎細胞后最終產生了有感染性的CSFV,雖然拯救出的帶有遺傳標記的CSFV比野生型生長能力上差一些,但仍具有感染性。這是較早的有關CSFV拯救的報道。此外,有報道首先建立表達T7 RNA 聚合酶的豬腎細胞系SK6,然后將CSFV基因組cDNA克隆線性化后轉染該細胞系,結果成功拯救出與野生型CSFV生物學特性
一樣的病毒,且病毒的效價比用體外制備轉錄本的方法高200倍,如對cDNA克隆不進行線性化直接用環型重組體進行轉染,則拯救出的病毒效價高20倍。此外,在CSFV疫苗株C株的反向遺傳研究上已有很多報道,其中在對標記疫苗、病毒復制、毒力和宿主特異性等方面都有相關報道。