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直面食品安全新標(biāo)準(zhǔn)—食品中維生素的含量測定（II）
前? 言
維生素是機(jī)體維持正常代謝和功能所必須的一類化合物，一般無法由生物體自身合成，需要通過飲食等手段獲得。
B族維生素作為輔酶，對人體內(nèi)糖、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝起著至關(guān)重要的作用。其中維生素B1、維生素B2、維生素B3、維生素B5、維生素B6、維生素B9、維生素B12等為人體常用。維生素C（又名抗壞血酸）具有一系列的生理功能，如增強(qiáng)人體免疫功能、預(yù)防和治療缺鐵性貧血、預(yù)防和治療壞血病、促進(jìn)膠原的形成和類固醇的代謝、抗衰老、防癌抗癌等作用。維生素K具有防止新生嬰兒出血疾病、預(yù)防內(nèi)出血及痔瘡、促進(jìn)血液正常凝固等生理作用。
因此，維生素作為營養(yǎng)強(qiáng)化劑已經(jīng)在食品工業(yè)的部分產(chǎn)品中開始使用，測定食品中維生素的含量，不僅可以評價(jià)食品的營養(yǎng)價(jià)值，而且還可以監(jiān)督維生素作為營養(yǎng)強(qiáng)化劑的劑量，以防止攝入量過多引起中毒反應(yīng)。
近兩年，食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)相繼更新了食品中維生素B12、B6、K2和維生素D的測定方法，上期已對維生素D在線柱切換反相液相色譜法進(jìn)行了介紹，本期將重點(diǎn)介紹維生素B1、B2、B6、B12、C、K1、K2的解決方案。
儀器配置
01儀器
Chromai Leaps高效液相色譜系統(tǒng)
Leaps四元泵（P40）
Leaps標(biāo)準(zhǔn)型自動進(jìn)樣器（帶制冷）（A10C）
Leaps 標(biāo)準(zhǔn)加熱型柱溫箱（C10）
Leaps紫外-可見檢測器（D10）或Leaps熒光檢測器（FL）
02
色譜柱
維生素B1/K1：Chromai Lotus C18（4.6*250 mm, 5 μm）(貨號：3.1.04.0009)
維生素B2/B6/K2：Chromai Lotus C18（4.6*150 mm, 5 μm）（貨號：3.1.04.0008）
維生素B12：Chromai Lotus C18（4.6*150 mm, 3 μm）（貨號：Y.1.01732）
維生素C：Chromai Lotus Polar C18（4.6*250 mm, 5 μm）（貨號：Y.1.01684）
實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論
01
標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖
參考標(biāo)準(zhǔn)方法中所列色譜條件，得到各種維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖，如圖1所示。
維生素B1
維生素B2
維生素B6
維生素B12
維生素C
維生素K1
維生素K2
圖1 維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖
02
線性范圍及檢出限
將不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別進(jìn)樣，得到并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在線性范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999。
根據(jù)信噪比數(shù)據(jù)得到各化合物的檢出限，符合相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)要求。
表1 線性范圍及檢出限
化合物名稱
線性范圍
標(biāo)準(zhǔn)曲線方程
R2
檢出限
維生素B1
0.05~1.0
μg/mL
y=2.705x+0.0021
0.9999
0.8 μg/100g
維生素B2
0.02~1.0 μg/mL
y=17,571,699.20x- 27,372.52?
0.9999
0.1 μg/100g
維生素B6
吡哆醛
0.015~1.0 μg/mL
y=17,226,383.79x- 66,845.44
0.9999
0.005 mg/kg
吡哆醇
0.015~1.0 μg/mL
y=24,064,833.66x- 253,157.10
0.9996
0.005 mg/kg
吡哆胺
0.015~1.0 μg/mL
y=16,244,871.61x- 117,154.16
0.9999
0.02 mg/kg
維生素B12
30~200 ng/mL
y=0.0866x-0.0816
0.9999
0.2 μg/100g
維生素
C
L(+)-抗壞血酸
0.5~50.0 μg/mL
y=56.67047x+0.34317
0.9998
固體
0.016?mg/100g
液體
0.003?mg/100g
D(-)-抗壞血酸
0.5~50.0 μg/mL
y=54.99530x-6.29638
0.9999
固體
0.067 mg/100g
液體
0.013 mg/100g
維生素
K1
10~400 ng/mL
y=0.02110x+0.00348
0.9999
1.5 μg/100g
維生素
K2
四烯甲萘醌（MK-4)
0.025~1.0 μg/mL
y=5.19057x-0.01373
0.9999
5.6 μg/kg
七烯甲萘醌
（MK-7)
0.025~1.0 μg/mL
y=3.48727x-0.01573?
0.9998
14 μg/kg
九烯甲萘醌
（MK-9)
0.05~1.0 μg/mL
y=2.69603x-0.01425
0.9995
40 μg/kg
03
系統(tǒng)精密度
對一定濃度的樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣六針考察儀器系統(tǒng)的精密度，結(jié)果見表2。
在Chromai Leaps高效液相色譜系統(tǒng)中，除維生素C外，保留時(shí)間RSD均小于0.1%，峰面積RSD均小于0.4%，系統(tǒng)精密度結(jié)果優(yōu)異，滿足食品中維生素含量測定的定量要求。
表2 連續(xù)六針進(jìn)樣精密度結(jié)果
化合物名稱
保留時(shí)間 RSD%
峰面積 RSD%
維生素B1
0.06%
0.15%
維生素B2
0.10%
0.28%
維生素B6
吡哆醛
0.01%
0.11%
吡哆醇
0.01%
0.11%
吡哆胺
0.02%
0.13%
維生素B12
0.10%
0.13%
維生素C
L(+)-抗壞血酸
0.12%
0.48%
_
D(-)-抗壞血酸
0.15%
0.54%
維生素K1
0.03%
0.14%
維生素K2
四烯甲萘醌（MK-4)
0.02%
0.04%
七烯甲萘醌（MK-7)
0.01%
0.32%
九烯甲萘醌（MK-9)
0.01%
0.32%
結(jié)論
采用Chromai Leaps高效液相色譜系統(tǒng)，搭配紫外檢測器或熒光檢測器，進(jìn)行食品中各種維生素含量的測定，在對應(yīng)的食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的線性范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.999，檢出限結(jié)果優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的要求，并且連續(xù)六針進(jìn)樣的系統(tǒng)精密度結(jié)果優(yōu)異，符合維生素含量測定的定量要求。
參考文獻(xiàn)
[1]?GB 5009.84-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素B1的測定》第一法 高效液相色譜法
[2]?GB 5009.85-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素B2的測定》第一法 高效液相色譜法
[3]?GB 5009.154-2023《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素B6的測定》第三法 高效液相色譜-熒光檢測法
[4]?GB 5009.285-2022《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素B12的測定》第一法 液相色譜法
[5]?GB 5009.86-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中抗壞血酸的測定》第一法 高效液相色譜法
[6]?GB 5009.158-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素K1的測定》第一法 高效液相色譜-熒光檢測法
[7]?GB 5009.290-2023《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素K2的測定》
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