分享至
應(yīng)用分享︱采用TSKgel Amide-80色譜柱液質(zhì)聯(lián)用法分析珍珠粉中氨基酸
珍珠為珍珠貝科動(dòng)物馬氏珍珠貝等雙殼類受刺激形成。珍珠粉含有多種活性成分，包括氨基酸類、牛磺酸、小分子活性肽等活性成分，具有安神定驚、明目消翳、解毒生肌、潤(rùn)膚祛斑等功效。中國(guó)是珍珠的主要生產(chǎn)國(guó)之一，淡水珍珠養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)繁茂，但缺乏規(guī)范性管理，產(chǎn)銷分離，且珍珠常作為保健產(chǎn)品，需求量大，所以市場(chǎng)上常有以次充好，以假亂真的現(xiàn)象。
本次分享的應(yīng)用中，作者采用了HILIC色譜柱TSKgel Amide-80的液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)( HPLC-MS/MS) 對(duì)不同來(lái)源珍珠粉中氨基酸類成分含量進(jìn)行測(cè)定和質(zhì)量評(píng)價(jià)。
分析條件
色譜柱：TSKgel?Amide-80?(2.0mmI.D.×15cm, 3μm)
流動(dòng)相A：0.2 %甲酸水溶液
流動(dòng)相B：乙腈
梯度：0~3/5 min, 60%~80%B; 3.5~4.5 min, 80% B; 4.5~4.6 min, 80%~60% B; 4.6~6.1 min, 60%B
流速：0.2 mL/min
柱溫：40℃
進(jìn)樣量：2 μL
質(zhì)譜條件：正離子, 多反應(yīng)檢測(cè) (MRM), 氣簾: 241.32 kPa, 離子化溫度: 550 ℃, 噴霧電壓: 5500 V
測(cè)定方法
以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，建立回歸方程。得到14個(gè)氨基酸的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)R范圍為：0.9964~1.0000，以3倍信噪比確定方法的檢測(cè)限范圍為：0.0010~0.0228 μg/mL，以10倍信噪比確定為方法的定量限范圍為：0.0032~0.0560 μg/mL。平行制備6份供試品溶液計(jì)算得到14個(gè)氨基酸峰面積的RSD為：1.53%~2.82%，表明該方法重復(fù)性良好。
?14個(gè)氨基酸對(duì)照品溶液 (400 ng/mL) 的HPLC-MS/MS (MRM) 色譜圖
1. Pro 2. Asp 3. Phe 4. Thr 5. Leu 6. Tyr 7. Ser 8. Val 9.Gly 10.Ala 11. His 12. Lys 13. Glu 14. Arg
結(jié)果與討論
采用TSKgel Amide-80色譜柱液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定珍珠粉中的氨基酸，可在10 min內(nèi)完成分離與測(cè)定，該方法操作簡(jiǎn)單、無(wú)需衍生化等繁瑣操作，快速、線性關(guān)系良好，具有較好的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度，可以用于珍珠粉中氨基酸類成分的測(cè)定及質(zhì)量評(píng)價(jià)。
參考文獻(xiàn)
[1]?王姣姣，徐迪輝，周婧 馬宏躍, 王恒斌，狄留慶，段金廒, 等. 不同來(lái)源珍珠粉中氨基酸類成分的HPLC-ESI-MS/MS分析與評(píng)價(jià)[J]. 中藥材, 2021, 44(7)：1668-1674.
[2]?Zhang JX, Li SR, Yao S, et al. Ultra-performance liquid chromatography of amino acids for the quality assessment of pearl powder [J].J Sep Sci,2015, 38(9): 1552-1560
[3]?國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S]. 一部. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2020：242-243.
SEC-MALS：讓腺相關(guān)病毒（AAV）表征更上一層樓東曹GPC用戶專訪：蘇州大學(xué)高分子材料與工程部朱健教授請(qǐng)收藏這個(gè)書架！產(chǎn)品目錄、技術(shù)手冊(cè)、應(yīng)用數(shù)據(jù)集在線瀏覽采用TSKgel DNA-NPR色譜柱分析質(zhì)粒DNA的拓?fù)洚悩?gòu)體非變性SEC-MS分析單克隆抗體時(shí)色譜柱的選擇
