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PMX ZetaView 助力單個細胞外囊泡上多種蛋白的原位熒光成像分析
開發適用于臨床樣本測定的外泌體單顆粒分析新方法，是目前該外泌體單顆粒研究領域的熱點之一。張教授團隊開發出一種新的外泌體單顆粒多蛋白數字化分析方法（digital profiling of proteins on individual exosomes，DPPIE），成功實現了對癌癥患者血漿樣本中外泌體單顆粒表面蛋白CD63/EpCAM/MUC1的原位熒光信號放大檢測。
使用anti-CD9抗體修飾的生物芯片直接捕獲血漿外泌體，使外泌體單個散落地分布在芯片表面；利用CD63核酸適體再次識別確認，消除游離蛋白的干擾并確保檢測的準確性；再使用EpCAM核酸適體和MUC1核酸適體識別外泌體上的特征腫瘤標志蛋白，設計基于滾環擴增反應的熒光原位信號放大策略，可視化分析外泌體單顆粒表面的多種蛋白，實現CD63/EpCAM/MUC1三蛋白陽性外泌體的靈敏檢測。
該方法的檢測限可低至10 vesicles/μL，靈敏度遠高于酶聯免疫吸附試驗和基于表面等離子體共振的商業化生物傳感器。結合T分布隨機近鄰嵌入聚類分析，DPPIE法能更準確地區分乳腺癌患者和健康志愿者的血漿樣本，并能用于肺腺癌和肺鱗癌等腫瘤亞型的精準分型。
EV樣品在ZetaView NTA散射光模式和熒光模式下的分析：
A. EV樣品在散射光模式下測得的粒徑分布。
B. EV樣品在熒光模式下測得的粒徑分布。
C. EV樣品在散射光模式下測得的濃度（1.6*108個/ml）和熒光模式下測得的濃度（1.3*108個/ml）
使用DPPIE法，研究團隊發現B淋巴細胞白血病和T淋巴細胞白血病患者的血漿中存在CD63/EpCAM/MUC1三蛋白陽性外泌體，可作為血液系統惡性腫瘤診斷的潛在生物標志物。研究團隊表示，DPPIE法具有簡便和通用的優勢，可通過改變核酸適體或抗體，廣泛應用于檢測外泌體上的其它特征腫瘤標志蛋白，有望用于臨床多種腫瘤的診斷和分類。
張俊利，師從張振中教授，于2021年12月入職于鄭州大學藥學院，直聘副研究員，主要研究方向為生物標志物分析。相關研究成果以第一作者或通訊作者在Journal of Extracellular Vesicles（2020，IF：25.841）、ACS Sensors（2023, IF：9.618）、Analytical Chemistry（2023, IF：8.008）、ACS Applied Materials & Interfaces（2020, IF：9.229）、Nanoscale（2022, IF：8.307）、Sensors and Actuators B:Chemical（2018, IF：6.393）和ACS Biomaterials Science & Engineering（2021, IF：5.395）等期刊上發表SCI論文7篇，授權國家發明專利1項。
△?生物納米顆粒（比如細胞外囊泡、外泌體、病毒或類病毒顆粒）在生命科學和納米藥物研究中的作用越來越重要。納米顆粒跟蹤技術（NTA）可以幫助研究人員檢測溶液中顆粒的大小以及濃度，并讓研究人員能夠親眼看到他們所測的樣品顆粒在溶液中的運動軌跡。2022年5月26日德國ParticleMetrix公司在法國的里昂ISEV2022年會（2022年5月25-29日）上隆重宣布最新一代的ZetaView??x30系列產品誕生，除了具有常規的NTA功能外，還新增加了12位熒光檢測通道和共定位分析功能，以其更方便的操作和超快的檢測速度又將進一步助力研究人員對EV-抗體偶聯物的熒光檢測。
大昌華嘉科學儀器部
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