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新品發布︱東曹推出FcR親和制備柱,助力抗體藥物糖鏈結構分析

東曹分離與純化
2021.6.04

單克隆抗體藥物的質量控制具有挑戰性,很大程度在于翻譯后修飾的多樣性。其中IgG-Fc結構域的糖鏈異質性因其對單克隆抗體與免疫細胞表面受體蛋白FcγRIIIa的親和力有重要的影響,而被認為是重要關鍵質量屬性,并進行嚴格控制。

東曹公司開發的新型親和色譜柱TSKgel FcR-IIIA-NPR,是以重組FcγRIIIa作為固定相配基,可對N-聚糖結構的抗體進行分析。現在,我們推出了同類親和制備柱——TSKgel FcR-IIIA-5PW,在選擇性上與分析型的TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱相同。使用該制備柱,可一次性制備和純化出用于分析糖鏈結構時所需的抗體樣品量。

?分離原理?

TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱是將重組FcγRIIIa作為固定相配基,鍵合到無孔親水性聚合物基質的填料上。抗體通常可以分離出3個洗脫峰。抗體糖鏈末端的半乳糖數量越多,在該色譜柱中的保留能力越強。

?FcR分析柱與制備柱的參數比較?

?FcR-IIIA-5PW制備柱的主要用途?

可按與分析柱FcR-IIIA-NPR相同的分離選擇性進行制備

可制備在質譜分析 (MS)、親和力 (SPR法)、ADCC活性等糖鏈分析時足夠使用的抗體量 (1~10 mg)

對于使用分析柱無法完全檢測出的微量抗體成分,可使用制備柱濃縮后進一步分離分析

在流穿模式下,將單克隆抗體樣品與已去除糖鏈的去糖基化抗體分離去除

?應用實例: 抗體成分的制備與分析?

使用制備柱在51-67 min期間每隔2 min收集一次樣品組分,然后用分析柱FcR-IIIA-NPR進一步分析。該制備柱采用的是多孔填料,粒徑為10 μm,所以樣品上樣量可高于5 mg。

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