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純化工藝的又一“新選擇 "——羥基磷灰石填料Ca++Pure-HA

東曹分離與純化
2020.3.27

羥基磷灰石(hydroxyapatite,HA)是目前最具有特征的混合模式填料之一,由于其結晶的化學結構、立體構造的特點,羥基磷灰石與抗體的Fab片段、Fc片段可發生相互作用。所以至今為止,羥基磷灰石在抗體及蛋白質的純化、多聚體和殘留核酸的去除等工藝中,作為精細純化步驟的填料被廣泛使用。并且,該填料兼具離子交換和金屬親和力,具有其他填料不具備的特殊分離能力,能夠為生物大分子分離純化提供獨特的解決方案。

羥基磷灰石純化工藝的“新選擇”!

Ca++Pure-HA羥基磷灰石填料由東曹公司采用了優質頂級材料,通過專有工藝研發生產的高純度的10nm×100nm六邊形截面晶體,凝聚成球狀顆粒。經過高溫燒結,提高了機械強度和化學穩定性,能夠滿足工業規模的純化要求。Ca++Pure-HA強大的特性使其可以在高流速和大型層析柱中重復循環使用。

Ca++Pure-HA的應用范圍

分離抗體及蛋白質的多聚體、異構體、分解物、電荷異質體等目標產品內源性雜質

分離DNA、HCP、病毒等來自生產工藝或混入的外源性雜質

適用于最終(精純)步驟中的分離純化

酸性條件下各填料穩定性對比

上圖顯示的是,在裝填有高吸附型羥基磷灰石Ca++Pure-HA、市售高吸附型 (B公司Type I) 和高耐久型 (B公司Type II) 羥基磷灰石填料的層析柱中,連續用弱酸性蒸餾水通液時,層析柱的理論塔板數的變化情況。

市售品在大約80~90小時通液后,理論塔板數下降10%以上。與之相比,Ca++Pure-HA的理論塔板數雖然也會緩慢減少,但在約160小時之前,理論塔板數仍保持在90%以上。也就是說,Ca++Pure-HA屬于高吸附型,且在酸性條件下的耐久性更好。

單克隆抗體多聚體分離實例

下圖是使用Ca++Pure-HA精純IgG樣品的分離實例。配合使用氯化鉀洗脫緩沖液可以有效去除mAb中的聚集體和降解物。從分析結果中可以看到,單體峰和多聚體峰中間的分辨率較高。

隨后,對純化后的IgG樣品進行尺寸排阻色譜分析。結果顯示,單克隆抗體中多聚體的總量從18.8%降到了1.1%,顯著降低。

優異的耐堿性能

從下圖中可以看到,Ca++Pure-HA在0.5 mol/L的NaOH溶液中具有良好的耐堿性,即使超過65個CIP循環后,動態吸附載量也沒有明顯降低。

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