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血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)算方法

2023.6.01

血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)算方法(高中生物)如下:

計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格,一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格,而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格,共400小格;另一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格,而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格,總共也是400小格。

我們數(shù)的是每個(gè)小格中的細(xì)胞數(shù),要算一個(gè)大格中的細(xì)胞數(shù),一個(gè)大格中有400個(gè)小格,所以要乘以400。

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每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為1㎜,則每一大方格的面積為1㎜2,蓋上蓋玻片后,載玻片與蓋玻片之間的高度為0.1㎜,所以計(jì)數(shù)室的容積為0.1㎜3。其計(jì)算方法如下:

1.16×25的計(jì)數(shù)板計(jì)算公式:

細(xì)胞數(shù) ml=(100小格內(nèi)的細(xì)胞數(shù) 100)×400×1000×稀釋倍數(shù)

2.25×16的計(jì)數(shù)板計(jì)算公式:

細(xì)胞數(shù) ml=(80小格內(nèi)的細(xì)胞數(shù) 80)×400×1000×稀釋倍數(shù)

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操作方法:

1.視待測(cè)菌懸液濃度,加無(wú)菌水適當(dāng)稀釋(斜面一般稀釋100倍),以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。

2.取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊,在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。

3.將菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴(不宜過多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū),勿使氣泡產(chǎn)生,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。

也可以將菌懸液直接滴加在計(jì)數(shù)區(qū)上(不要使計(jì)數(shù)區(qū)兩邊平臺(tái)沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,造成計(jì)數(shù)區(qū)深度的升高),然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡)。

4.靜置片刻,使細(xì)胞沉降到計(jì)數(shù)板上,不再隨液體漂移。將血球計(jì)數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺(tái)上夾穩(wěn),先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近,觀察時(shí)應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。

5.計(jì)數(shù)時(shí)若計(jì)數(shù)區(qū)是由16個(gè)中方格組成,按對(duì)角線方位,數(shù)左上、左下、右上、右下的4個(gè)中方格(即100小格)的菌數(shù)。如果是25個(gè)中方格組成的計(jì)數(shù)區(qū),除數(shù)上述四個(gè)中方格外,還需數(shù)中央1個(gè)中方格的菌數(shù)(即80個(gè)小格)。

6.對(duì)于出芽的酵母菌,芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí),即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算。每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2-3次(每次數(shù)值不應(yīng)相差過大,否則應(yīng)重新操作),按公式計(jì)算出每mL(g)菌懸液所含細(xì)胞數(shù)量。

7.測(cè)數(shù)完畢,取下蓋玻片,用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,放入盒內(nèi)保存。


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