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小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞(MC3T3-E1)怎么養(yǎng)?

2020.4.14

MC3T3-E1 小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞

Catalogue No. C1047
Product Format a T25 flask
Culture Properties 貼壁
Complete Growth Medium 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
Atmosphere air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application Cells and cancer research
NOTE FOR RESEARCH USE ONLY。

Components

Item Specifications
a T25 flask 2X106
Manual 1 copy

Operation steps for cell culture

1、吸走用于培養(yǎng)基,加入 3-5mL PBS 后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞;

2、吸干凈 PBS 后加入 1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒(méi)細(xì)胞表面,培養(yǎng)瓶放 37 度培養(yǎng)箱消化;(細(xì)胞對(duì)于消化比較敏感,消化過(guò)度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài),導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長(zhǎng)。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時(shí)即可終止,禁止消化到細(xì)胞完全漂浮?;靹蚣?xì)胞時(shí)盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)

3、加入 6-8ml 完全培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹下細(xì)胞混勻;

4、將混勻的細(xì)胞 1000rpm(約 150g)離心 3min,棄上清,再用新鮮培養(yǎng)基重懸 37 度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng);

傳代比例: 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度不一,具體傳代比例視細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定,大部分細(xì)胞適用

1:3-1:4 傳代,生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞可以 1:2 傳代。

Cell cryopreservation

1、凍存液:92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇)

2、降溫步驟:4 度 10min,-20 度 2h,-80 過(guò)夜后液氮保存。

Tips

1、細(xì)胞經(jīng)過(guò)運(yùn)輸后,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900-1000rpm(約 150g)離心 3min,棄上清。加5mlPBS 重懸細(xì)胞,再 900-1000rpm(約 150g)離心 3min,用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次 PBS 重懸是為了去除碎片,如果平時(shí)碎片比較少,傳代時(shí)可以省略 PBS 重懸的步驟;如果碎片很多,建議 PBS 多洗幾次。

2、細(xì)胞生長(zhǎng)不均時(shí),可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。

3、細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢時(shí),可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)(最高不超過(guò) 20%),也可以根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài), 選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

4、不同細(xì)胞貼壁性差異比較大,所以消化時(shí)間差別較大,20s-10min? 均有可能,具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落,并可以輕輕吹下為準(zhǔn),嚴(yán)禁消化到細(xì)胞完全漂浮。戶消化過(guò)度導(dǎo)致細(xì)胞死亡、漂浮、生長(zhǎng)緩慢, 不提供免費(fèi)售后服務(wù)。

5、干冰發(fā)貨均為兩支,客戶先復(fù)蘇一支,若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。客戶同時(shí)復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳, 我方不提供免費(fèi)售后服務(wù)。

6、細(xì)胞狀態(tài)正常時(shí),應(yīng)盡快凍存細(xì)胞保種,凍存后應(yīng)隨機(jī)抽取一支檢測(cè)凍存效果。方不對(duì)客戶凍存細(xì)胞導(dǎo)致死亡負(fù)責(zé), 客戶凍存細(xì)胞死亡不提供免費(fèi)售后服務(wù)。



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