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用 CsCl，Percoll, Nycodenz, metrizamide作自形成密度梯度離心三

2020.7.14

表（三）metrizamide及其溶液的性質（20℃）

濃度	密度g/ml	折射率	粘性	滲透率
百分比濃度％（W/V）	Molar
0	0.000	0.9982	1.3330	1.0	0
10	0.127	1.0512	1.3483	1.3	107
20	0.253	1.1062	1.3646	1.6	180
30	0.380	1.1612	1.3809	2.3	247
40	0.507	1.2162	13971	3.6	320
50	0.633	1.2712	1.4133	6.0	385
60	0.760	1.3262	1.4295	11.0	440
70	0.887	1.3812	1.4456	26.0	-

表（四）Nycodenz及其溶液的性質（20℃）

濃度	密度g/ml	折射率	粘性	滲透率
百分比濃度％（W/V）	Molar
0	0.000	0.999	1.3330	1.0	0
10	0.122	1.052	1.3494	1.3	112
20	0.244	1.105	1.3659	1.4	221
30	0.365	1.159	1.3824	1.8	299
40	0.487	1.212	13988	3.2	388
50	0.609	1.265	1.4153	5.3	485
60	0.731	1.319	1.4318	9.5	595
70	0.853	1.372	1.4482	17.2	1045

五）膠體硅（Percoll）自形成梯度
Percoll的性狀（參考文獻 5）
成份：硅顆粒外包覆 PVP（聚乙烯基吡咯烷酮）
密度：1.130±0.005g/ml
顆粒尺寸：15～20nm
滲透率：＜25mosm
粘性：20℃時 10±5mpa?s
PH：20℃時 9.0±0.5
折射率：20℃時 1.3540±0.005
其他：有少量（1～2％）PVP小顆粒存在
???Percoll在離心場中的沉降形成密度梯度，因此 Percoll自形成密度梯度曲線的形狀取決于離心轉速和離心時間。Percoll是帶負電荷物質，離心過程中離子的積聚將影響梯度的穩定性。但由于 Percoll顆粒較大（15nm～20nm），擴散很慢，梯度一旦形成，可長時間保持穩定。Percoll梯度離心可以直接與樣品混合作自形成密度梯度離心，也可以先離心讓 Percoll自形成梯度再鋪樣品作預形成梯度離心。
??從下圖可以看出用日立 R20A2角轉頭（8×50ml，最高轉速 20,000rpm）。在 15,000rpm（RCFAV＝20,000×g），初始密度 1.07g/ml，不同離心時間的 Percoll自形成密度梯度曲線（也可以用其他品牌，同類轉頭）
密度（g/ml）??? 從液面算起的離心管水平方向的距離（毫米）
可以看出只要用很短時間，一般高速離心就可以得到我們需要的 Percoll自形成梯度曲線。
??對于分離一些較大顆粒樣品，如肝細胞，可以先讓 Percoll離心，自形成梯度，然后將肝細胞勻漿鋪在 Percoll已形成的梯度表面作速率－區帶密度梯度離心。預形成梯度用1,000×g，30分或用3,000×g，15分，梯度形成后鋪上勻漿作低速離心（1,000×g），
可以大大減少細胞的破損，自形成梯度形狀取決于轉頭幾何尺寸，離心轉速和離心時間。 Percoll自形成梯度也可以用于亞細胞構造如質膜，重線粒體的離心分離。在這方面 Pharmacia-Biosystems AB 公司做了大量的實驗，讀者可以在網上查詢或直接向該公司索取詳細的實驗資料。
附：表（五）用 0.25M蔗糖稀釋配制的 Percoll等滲液的密度

Percoll份數	0.25M蔗糖份數	密度 g/ml
10	0	1.148
9	1	1.136
8	2	1.125
7	3	1.113
6	4	1.101
5	5	1.089
4	6	1.078
3	7	1.066
2	8	1.054
1	9	1.043
0	10	1.031

表（六）用 0.15M Nacl稀釋配制的Percoll等滲液的密度

Percoll份數	0.15M NaCl份數	密度 g/ml
10	0	1.123
9	1	1.111
8	2	1.100
7	3	1.088
6	4	1.076
5	5	1.065
4	6	1.053
3	7	1.041
2	8	1.029
1	9	1.018
0	10	1.006

參考文獻：
【1】Houssais J.F.(1983) “Iodinated density gradient media ：a practical approach ” P： 43 IRL press. Ltd. Oxford.
【2】Birnie, G.D, Rickwood, D “Biological Separations in iodinated density gradient media , P193, IR1 press, Oxford.
【3】Miloslav, D., Richard, Hinton “Condition for density gradient separations” in “Preparative Centrifugation”. IRL press . Oxford. Uni.press.1992
【4】Rickwood .D. Birnie, G.D “Centrifugal separations in molecular and cell biology ,” Butterworths London(1998)
【5】Rickwood, D. Ford, T. steengard , J “Centrifugation, Essential Data” P.44 John Wiley and Sons 1994

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