血球計數板細胞計數法步驟和注意事項
細胞計數法是用來計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板（血球計數板）進行。即可用于分離（散）細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，也可用于對培養物的細胞數量進行計數。不論計數的對象如何，均須制備分散的細胞懸液。
一、步驟
1、制備細胞懸液：對于懸液培養的細胞，可直接進行下面的步驟2（計數與計算過程）。如果計數對象為貼壁生長的細胞，首先需將培養物按如下步驟制備成細胞懸液。
1）、終止培養，將培養液吸出，用PBS洗培養物一次。
2）、給培養瓶內加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液，于37℃消化3～5min 。期間不斷在鏡下觀察。當細胞變圓接近脫壁時，棄消化液。
3）、加入一定量的培養液（如果這些培養細胞不再有用，可加PBS），用吸管吹打，使細胞脫壁而制成細胞懸液。
2、計數與計算過程
1）、在細胞計數板中央放置計數專用的蓋玻片。
2）、用玻璃虹吸管吸取細胞，讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流出懸液，至蓋玻片被液體充滿為止。
3）、置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對于壓線的細胞只計數在上線和左線者，對于細胞團按單個細胞計數。
4）、按下式計數細胞懸液的密度：細胞密度＝（4個大格細胞總數/4）×104個/ml 。
二、注意事項：
1）、務必使分散成單個細胞，取樣計數前，充分混勻細胞懸液。
2）、顯微鏡下計數時，遇到2個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞計算。如果細胞團>10％，說明細胞分散不充分。
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