如何使用 BioTek 酶標儀,實現高通量微量樣本吸收光檢測?
核酸和蛋白樣品太多,如何做批量檢測呢?不要著急,BioTek Take 3 板就能實現高通量微量樣品檢測,快來跟小編學習新技能吧。
儀器及配件
儀器:BioTek 全光譜酶標儀。
配件:Take 3 板(可進行 16 個樣品檢測)或者 Take 3 Trio 板(可進行 48 個樣品檢測)。
操作流程
以檢測 dsDNA 為例進行操作流程介紹,具體如下:
1?
軟件中增加 A260/A230 數值
軟件默認檢測 260nm 和 280nm 處吸光值,自動計算 A260/A280 純度比,若想查看 A260/A230 純度比值,需要在軟件上進行設置。
注:對于純的 dsDNA,A260/280 比值應該在 1.8-2.0,A260/230 比值?≥2.0 。A260/230 比值偏低指征樣品中可能有苯酚、胍、碳水化合物等殘留。
打開軟件,在菜單欄
彈出下方對話框,
按照下圖參數進行設置,勾選“Sencondary Ratio Wavelength”,默認波長為 230nm,設置完成后,檢測樣品時會自動采集 260nm、280nm 和230nm 處的吸光值,并在結果中自動顯示 A260/A280 和 A260/230 比值。
注:對于 dsDNA Extinction Coefficient 數值為 50 ,ssDNA 為 33 ,RNA 為 40 。
2?
在 Take 3 或者 Take 3 Trio 上加樣品
以 Take 3 為例介紹
Take 3 可檢測 16 個樣品,可使用排槍進行加樣,每個樣品點處加 2ul 樣品,不要有氣泡。最少設置兩個孔為 Blank ,進行背景扣除。完成后輕輕蓋上,防止液體飛濺。
注:使用溶解 dsDNA 的 buffer 作為 Blank :如使用 TE buffer 溶解,則使用 TE buffer 做 Blank 。
3?
開始檢測
將 Take3 板放置于 BioTek 載板臺上,Take 3 A1 位置與儀器載板臺 A1 位置對齊。
打開 Gen5 軟件,在 Task Manager 中“Read Now”處選擇“Nucleic Acid Quantification”進入核酸檢測界面。
Sample type 選擇 dsDNA+A230 。
在 Well Type 中選擇“Blank”,最少設置兩個孔為 Blank?孔。軟件會以 Blank 孔的平均值進行背景扣除。若 Blank 孔的 CV% 超過 10% ,軟件將進行提醒,且不進行樣品檢測,直至 Blank 孔 CV% 在 10% 以內。在 Well Type 中選擇“Sample”,進行檢測樣品的設置,若有重復,可在 Repication 處進行設置。
設置完成后,
注:檢測完成后,結果將自動導出到 Excel 中,因此,電腦上要裝上 Office 哦。
完成實驗后可
取出 Take 3 板子,用無塵紙將板子和蓋子上液體擦拭干凈即可。
關于BioTek
BioTek是世界領先的多功能微孔板檢測儀及軟件的研發生產公司,擁有54年的悠久歷史。BioTek的Synergy系列多功能微孔板檢測儀擁有靈活的功能配置和優異的檢測結果,配合友好強大的操作軟件,為廣大用戶提供了便捷高效的使用體驗。服務科學,促進科學始終是我們追求的目標。2019年BioTek加入安捷倫科技有限公司,成為細胞分析事業部的重要組成成員。
關于安捷倫
安捷倫科技有限公司(紐約證交所:A)是生命科學、診斷和應用化學市場領域的全球領導者,致力于為提高生活質量提供敏銳洞察和創新經驗。安捷倫的儀器、軟件、服務、解決方案和專家能夠為客戶最具挑戰性的難題提供更可靠的答案。2020財年,安捷倫的營業收入為53.4億美元,全球員工數為16,400人。