快來看看各國藥典規定的HPLC方法的調整范圍吧
所謂藥典方法，顧名思義，就是藥典專論所收載的方法。但是否每個人都知道，藥典方法考慮到各個實驗室的差異，有一定的可調范圍。
下面我們具體地來探討一下這個問題吧!
0512高效液相色譜法規定如下
品種正文項下規定的色譜條件（參數）除填充劑種類、流動相組分、檢測器類型不得改變外，其余如色譜柱內徑與長度、填充劑粒徑、流動相流速、流動相組分比例、柱溫、進樣量、檢測器靈敏度等，均可適當改變，以達到系統適用性試驗的要求。調整流動相組分比例時，當小比例組分的百分比例X小于33%時，允許改變范圍為0.7X?1.3X；當X大于33%時，允許改變范圍為X—10%?X+10%。
由上文可知，中國藥典專論方法除填充劑種類、流動相組分（比例調整在規定范圍內）、檢測器類型不得改變外，其他條件改變了，還是認為是藥典方法。但中國藥典沒有規定方法確認之說，所以，即使是中國藥典方法，也是應該按分析方法驗證的相關規定進行全套的方法驗證。
USP43<621>CHROMATOGRAPHY規定如下：
為符合系統適用性的要求而調整的操作條件是允許的，除非專論項下另有規定，下面為所列的最大的可調范圍，這些調整需要額外的確認數據。為確認新條件對方法的適用性，評估調整對相關分析性能特征存在的潛在影響。多條件的調整，將對系統性能產生累積影響，實施前需仔細考慮。
1、流動相緩沖液的pH（HPLC）:±0.2單位以內或規定范圍以內調節，適用梯度及等度。
2、流動相緩沖液鹽濃度（HPLC）：±10%（pH允許情況下），適用梯度及等度。
3、流動相中組分比例（HPLC）：組分比例≤50%的組分可以相對調節±30%，但是任意一組分比例的調節不應超過±10%（相對于總的流動相），含三組分的流動相的調節可以分組分進行，含雙組分的流動相的調節可在最小的組分進行。雙組份和三組分的調節實例如下：
雙組分：例如流動相50:50，其中一組分50%的30%是15%，但是它超過了占總體比例±10%的規定，所以這個流動相比例的調節范圍應以±10%為限，可以在不超過40:60~60:40的范圍之間調節。再例如流動相比例為2:98，其中小組分2%的30%是0.6%，這個值不超過占總體比例±10%的規定，此流動相的比例可以在不超過1.4:98.6~2.6:97.4的范圍之間調節。
三組分：例如流動相60:35:5，它的次組分35%的30%是10.5%，但是它超過了占總體比例±10%的規定，所以這個流動相比例中的次組分的調節范圍應以±10%為限。對于最小組分5%的30%是1.5%。可以在不超過50:45:5~70:25:5或58.5:35:6.5~61.5:35:3.5的范圍之間調節。
4、紫外檢測器的波長（HPLC）:專論中規定的檢測波長不允許改變，檢測器供應商的程序或另一個驗證程序來說明，波長檢測誤差，最多不得超過±3nm。
5、固定相
色譜柱長度(GC):可以在±70%范圍內調節。
色譜柱長度(HPLC):見粒徑項下。
色譜柱內徑(HPLC):如果線速度保持恒定，可以調整。見HPLC流速。
色譜柱內徑(GC):最大可調整至±50%。
膜厚(毛細管柱GC):最大可在?50%至100%調整。
6、粒徑(HPLC):等度洗脫：粒徑和柱長均可以修改，但柱長（L）與粒徑（dp）的比值（L/dp）恒定或在規定柱長與粒徑的比值的-25%~+50%范圍內。或者（對于將粒度調節應用于表面多孔顆粒時），其它柱長（L）和粒度（dp）的柱子可以使用，但理論塔板數（N）應在規定柱的-25%~+50%范圍內。如果調節導致更高的理論塔板數時應注意，這樣將產生更小的峰體積，應通過縮小額外柱外峰拓寬的因素調整，例如儀器的管路、檢測池的體積、采樣速率和進樣體積。當專論中未規定粒度時，該比值應采用規定柱的最大粒度計算。
7、粒徑(GC):如果色譜圖的符合系統適用性要求以及粒徑范圍比相同，粒度大小可以從大變小或從小變大，粒徑范圍比的定義是最大粒度直徑除以最小粒度直徑。
8、流速(GC):流速可以最大在±50%調整。
9、流速(HPLC)：當粒度改變時，流速也許需要調整，因為為達到相同的性能，小粒度的柱子需要更高的線速度（測量通過較少塔板高度），流速、柱內徑、粒度通過下面公式換算。F2=F1×[(dc22×dp1)/(dc12×dp2)]
對于等度洗脫，如果粒度從≥3μm變化到＜3μm時，將增加線速度（通過調整流速），如果柱效不下跌20%以上，相同地，如果粒度從＜3μm變化到≥3μm時，應減少線速度（流速）來避免柱效降低20%以上。梯度洗脫：流速、柱內徑、粒度將不允許調整。另外，流速可以在±50%調整。（只適用于等度洗脫）
EP10.0 2.2.46Chromatographic Separation Techniques規定如下
1、液相色譜-等度洗脫：
（1）小組分的數量可以在相對±30%或絕對±2%范圍內調節，兩者取其大。
（2）流動相中水相組分的pH：除非專論中另有規定，用于配制流動相的pH可以在規定的值或范圍的±0.2以內調節。如果待測品為非電離物質（中性物質），pH可在±1.0范圍內調節。
（3）流動相中緩沖液鹽濃度：用于配制流動相的含水緩沖液的鹽的濃度可在±10%范圍內調節。
（4）流速：一般調節范圍為±50%，若柱尺寸改變了，流速可以更大范圍內調節，具體可按下述公式來計算。
（5）色譜柱參數：
固定相：固定相的屬性不能改變（例如：不能用C8來代替C18）；
粒徑：最多可減小50%，不允許增加。
色譜柱長度:可以±70%范圍內調節。
色譜柱內徑：可在±25%范圍內調節。
當柱的尺寸改變時，流速通過下面公式進行調節。F2=F1×[(l2×d22)/(l1×d12)]
（6）柱溫：除另有規定，可以在規定柱溫±10℃范圍內調節，除非另有規定。
（7）檢測波長：不允許改變。
（8）進樣體積：若待檢峰的靈敏度和重復性好的話可以減小，不允許提高。
2、液相色譜-梯度洗脫
流動相的組成/梯度洗脫可以在符合下述條件的前提下進行小范圍的調節：
滿足系統適應性的條件；主峰的出峰時間在原定保留時間的±15%以內；流動相中最終組分的洗脫能力的強度不得弱于原規定組分；如果系統適應性的條件達不到，則通常考慮滯留體積或更換柱子。
（1）滯留體積（死體積）：儀器的結構將會大大的改變分離度、保留時間、相對保留時間，如果這些發生，是由于滯留體積過多。專論中通常在梯度洗脫時先進行等度洗脫。考慮到方法開發系統和實際系統的滯留體積的不同，所以梯度洗脫的時間應該足夠。所以使用者在進行方法確認時應確認等度洗脫的時間。如果洗脫時的滯留體積在專論中有規定，則開始洗脫的時間點（tmin）應該被調節時間點(tcmin)替代。用下面公式計算式中：D：滯留體積，ml；D0：方法開發時的滯留體積，ml；F：流速ml/min。如果方法的驗證沒有包括該步驟，用于上述目的的等度的描述可以被省略。
（2）流動相中緩沖液的pH：不允許調節。
（3）流動相中緩沖液鹽的濃度：不允許調節。
（4）流速：當柱子的內徑改變時，調節是可以接受的，具體見流速公式。
（5）柱參數
固定相：固定相的屬性不能改變（例如：不能用C8來代替C18）；
粒徑，不允許調節。
色譜柱長度：長度可以±70%范圍內調節。
內徑：可在±25%范圍內調節。
當柱的尺寸改變時，流速按照下面的公式進行計算并調節。
F2=F1×[(l2×d22)/(l1×d12)]
（6）柱溫：除另有規定外，溫度可在標準規定溫度±5℃范圍內調節。
（7）檢測波長：不允許改變。
（8）進樣體積：若待檢峰的靈敏度和重復性可滿足的話可以減小，不允許提高。
3、氣相色譜
（1）柱參數
固定相粒徑：粒徑最多可減少50%，不允許增加（填充柱）。
膜厚：可以在-50%~+100%范圍內調節（毛細管柱）。
色譜柱長度：色譜柱長度可以±70%范圍內調節。
色譜柱內徑：可以在±50%范圍內調節。
（2）流速（GC）：可以在±50%范圍內調節。
（3）柱溫（GC）：可以在±10%范圍內調節。
（4）進樣體積和分流比：若待檢峰的靈敏度和重復性可以滿足的話，可以調節。
USP與EP規定的可調范圍基本一致，相較于梯度洗脫，EP藥典更加謹慎，基本上不允許進行過多的調整。此外藥典方法，EP與USP均要求進行方法確認，并且明確指出，藥典方法可以不進行全套的驗證。
-
標準
-
焦點事件
-
焦點事件
-
企業風采
