樣品處理——固相微萃取技術(shù)應(yīng)用
1 簡介
固相微萃取技術(shù)克服了傳統(tǒng)樣品前處理技術(shù)的缺陷，集采樣、萃取、濃縮、進(jìn)樣于一體，大大加快了分析檢測的速度。其顯著的技術(shù)優(yōu)勢正受到環(huán)境、食品、醫(yī)藥行業(yè)分析人員的普遍關(guān)注，并大力推廣應(yīng)用。]
固相微萃取技術(shù)是基于采用涂有固定相的熔融石英纖維來吸附、富集樣品中的待測物質(zhì)。其中吸附劑萃取技術(shù)始于1983年，其最大特點(diǎn)是能在萃取的同時(shí)對分析物進(jìn)行濃縮，目前最常用的固相萃取(SPE)技術(shù)就是將吸附劑填充在短管中，當(dāng)樣品溶液或氣體通過時(shí)，分析物則被吸附萃取，然后再用不同溶劑將各種分析物選擇性地洗脫下來。
固相微萃取裝置類似于一支氣相色譜的微量進(jìn)樣器，萃取頭是在一根石英纖維上涂上固相微萃取涂層，外套細(xì)不銹鋼管以保護(hù)石英纖維不被折斷，纖維頭可在鋼管內(nèi)伸縮。將纖維頭浸入樣品溶液中或頂空氣體中一段時(shí)間，同時(shí)攪拌溶液以加速兩相間達(dá)到平衡的速度，待平衡后將纖維頭取出插入氣相色譜汽化室，熱解吸涂層上吸附的物質(zhì)。被萃取物在汽化室內(nèi)解吸后，靠流動相將其導(dǎo)入色譜柱，完成提取、分離、濃縮的全過程。固相微萃取技術(shù)幾乎可以用于氣體、液體、生物、固體等樣品中各類揮發(fā)性或半揮發(fā)性物質(zhì)的分析。固相微萃取技術(shù)已在環(huán)境、生物、工業(yè)、食品、臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的各個(gè)方面得到廣泛的應(yīng)用。在發(fā)展過程中，主要涉及到探針的固相涂層材料及涂漬技術(shù)、萃取方法、聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展、理論的進(jìn)一步完善和應(yīng)用等幾個(gè)方面。
2 原理
以熔融石英光導(dǎo)纖維或其它材料為基體支持物，采取“相似相溶”的特點(diǎn)，在其表面涂漬不同性質(zhì)的高分子固定相薄層，通過直接或頂空方式，對待測物進(jìn)行提取、富集、進(jìn)樣和解析。然后將富集了待測物的纖維直接轉(zhuǎn)移到儀器(GC或HPLC)中，通過一定的方式解吸附(一般是熱解吸，或溶劑解吸)，然后進(jìn)行分離分析。
固相微萃取法（SPME）的原理與固相萃取不同，固相微萃取不是將待測物全部萃取出來，其原理是建立在待測物在固定相和水相之間達(dá)成的平衡分配基礎(chǔ)上。
3 特點(diǎn)
集取樣、萃取、濃縮和進(jìn)樣于一體，操作方便，耗時(shí)短，測定快速高效 。
無需任何有機(jī)溶劑，是真正意義上的固相萃取，避免了對環(huán)境的二次污染 。
儀器簡單，無需附屬設(shè)備，適于現(xiàn)場分析，也易于操作。
靈敏度高，可以實(shí)現(xiàn)超痕量分析，可以達(dá)到納克每克級別的檢測。
4 萃取
4.1
萃取方式
固相微萃取方法分為萃取過程和解吸過程兩步：
1、萃取過程——具有吸附涂層的萃取纖維暴露在樣品中進(jìn)行萃取。
2、解吸過程——將以完成萃取過程的萃取器針頭插入氣相色譜進(jìn)樣裝置的氣化室內(nèi)，使萃取纖維暴露在高溫載氣中，并使萃取物不斷地被解吸下來，進(jìn)入后序的氣相色譜分析 。
固相微萃取有三種基本的萃取模式：直接萃取（Direct Extraction SPME）、頂空萃取(Headspace SPME)和膜保護(hù)萃取（membrane-protectedSPME）。
4.1.1
固相微萃取直接萃取
直接萃取方法中，涂有萃取固定相的石英纖維被直接插入到樣品基質(zhì)中，目標(biāo)組分直接從樣品基質(zhì)中轉(zhuǎn)移到萃取固定相中。在實(shí)驗(yàn)室操作過程中，常用攪拌方法來加速分析組分從樣品基質(zhì)中擴(kuò)散到萃取固定相的邊緣。對于氣體樣品而言，氣體的自然對流已經(jīng)足以加速分析組分在兩相之間的平衡。但是對于水樣品來說，組分在水中的擴(kuò)散速度要比氣體中低3-4個(gè)數(shù)量級，因此須要有效的混勻技術(shù)來實(shí)現(xiàn)樣品中組分的快速擴(kuò)散。比較常用的混勻技術(shù)有：加快樣品流速、晃動萃取纖維頭或樣品容器、轉(zhuǎn)子攪拌及超聲。
這些混勻技術(shù)一方面加速組分在大體積樣品基質(zhì)中的擴(kuò)散速度，另一方面減小了萃取固定相外壁形成的一層液膜保護(hù)鞘而導(dǎo)致的所謂“損耗區(qū)域”效應(yīng) 。
4.1.2
固相微萃取頂空萃取
在頂空萃取模式中，萃取過程可以分為兩個(gè)步驟：
1、被分析組分從液相中先擴(kuò)散穿透到氣相中；
2、被分析組分從氣相轉(zhuǎn)移到萃取固定相中。這種改型可以避免萃取固定相受到某些樣品基質(zhì)（比如人體分泌物或尿液）中高分子物質(zhì)和不揮發(fā)性物質(zhì)的污染。
在該萃取過程中，步驟2的萃取速度總體上遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于步驟1的擴(kuò)散速度，所以步驟1成為萃取的控制步驟。因此揮發(fā)性組分比半揮發(fā)性組分有著快得多的萃取速度。實(shí)際上對于揮發(fā)性組分而言，在相同的樣品混勻條件下，頂空萃取的平衡時(shí)間遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于直接萃取平衡時(shí)間。
4.1.3
膜保護(hù)萃取
膜保護(hù)SPME（圖）的主要目的是為了在分析很臟的樣品時(shí)保護(hù)萃取固定相避免受到損傷，與頂空萃取SPME相比，該方法對難揮發(fā)性物質(zhì)組分的萃取富集更為有利。另外，由特殊材料制成的保護(hù)膜對萃取過程提供了一定的選擇性。
5 影響因素
5.1
萃取頭的種類和膜厚
目前商品化的萃取頭有七類，固定相可以以鍵合型、非鍵合型、部分交聯(lián)和高度交聯(lián)四種形式涂附在石英纖維上。涂層在有機(jī)溶劑中的穩(wěn)定性按以下順序減小：鍵合型>部分交聯(lián)>非鍵合型。涂層的極性對待測物的選擇萃取有很大影響，根據(jù)“相似相溶”原理，非極性涂層有利于對非極性或極性小的有機(jī)物的分離；極性涂層對極性有機(jī)物的分離效果較好。除此之外，涂層的厚度對于分析物的吸附量和平衡時(shí)間也有影響，厚的涂層適于揮發(fā)性的化合物，而薄涂層在萃取大分子或半揮發(fā)性的化合物時(shí)更顯優(yōu)勢，涂層越厚，吸附量越大，有利于擴(kuò)大方法的線性范圍和提高方法的靈敏度，但是達(dá)到平衡則需要更長的時(shí)間，但是，萃取涂層的厚度和長度受到萃取纖維支持材料的限制，如常用的石英纖維材料質(zhì)地較脆，能在其表面涂漬高分子固定相薄膜的種類及數(shù)量有限。具體來說，高分子固定相涂層對有機(jī)物的萃取和富集是一種動態(tài)平衡過程，涂層要對有機(jī)分子有較強(qiáng)的選擇。
5.2
萃取溫度
萃取溫度對固相微萃取存在著雙重作用，溫度增加，可以加快待測物的分子擴(kuò)散速度，有利于盡快達(dá)到平衡，但是溫度的增加，有使得平衡分配系數(shù)K減小、涂層對待測物的吸附量減少，降低了靈敏度，對于HS—SPME來說，還有液上溫度，一般來講，液上溫度低有利于吸附。
5.3
萃取時(shí)間
萃取時(shí)間由多方面影響，包括萃取頭的種類和膜厚、吸附能力、待測物的在基質(zhì)與涂層之間的分配系數(shù)、擴(kuò)散速度、基質(zhì)的多少等。一般說來，分配系數(shù)小的物質(zhì)需要的萃取時(shí)間長。為了提高實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性，一般實(shí)驗(yàn)時(shí)要選擇相同的萃取時(shí)間。
5.4
鹽效應(yīng)和pH的影響
兩者在實(shí)質(zhì)上是一樣的，都是影響了基質(zhì)的離子強(qiáng)度，從而影響了待測物在基質(zhì)和涂層之間的分配系數(shù)。鹽效應(yīng)分為“鹽溶”和“鹽析”兩種。鹽溶是由于離子強(qiáng)度的增加，增大了待測物在基質(zhì)中的溶解量，不利于萃取的進(jìn)行；“鹽析”是由于離子強(qiáng)度的增加減少了待測物在基質(zhì)中的溶解，使K值增大，從而提高了萃取效率。鐘海燕等發(fā)現(xiàn)在風(fēng)味物質(zhì)萃取過程中，可以提高萃取效果，尤其是分子量較大的化合物更為明顯。pH的影響是通過調(diào)節(jié)酸堿度而影響了溶液中的離子強(qiáng)度從而改變了待測物在基質(zhì)中的溶解性。
5.5
攪拌效率的影響
攪拌可以加快基質(zhì)的傳遞，從而縮短了萃取時(shí)間，特別是對于高分子量和高擴(kuò)散系數(shù)的組分。常用的攪拌方式有：超聲波攪拌、電磁攪拌、高速勻漿，采取攪拌方式時(shí)一定要注意攪拌的均勻性，不均勻的攪拌比沒有攪拌的測定精確度更差。
5.6
解吸溫度
解吸溫度是影響固相微萃取的另一個(gè)因素。在一定的溫度下，解吸的時(shí)間越長，解吸越充分，若解吸不充分，可能對下一次的萃取造成污染。在一定的時(shí)間下，溫度越高越利于解吸，但是溫度過高，會縮短萃取纖維的壽命，一般常選擇萃取頭的老化溫度作為解吸溫度。
6 應(yīng)用
6.1在環(huán)境樣品檢測中的應(yīng)用
固相微萃取法最早的應(yīng)用就是在環(huán)境樣品的檢測中，至今其在環(huán)境樣品的微量元素分析中仍發(fā)揮著巨大的作用。應(yīng)用比較廣泛的有固態(tài)（如沉積物、土壤等）、液態(tài)（飲用水和廢水等）及氣態(tài)（空氣、香料和廢氣等）的樣品分析。在固態(tài)樣品中的應(yīng)用有在底泥中丁基錫化合物的檢測、土壤和沉積物中的有機(jī)氯及硝基化合物、污泥等沉積物中脂肪酸類洗滌劑組分和污泥中苯系列及其鹵代物等有機(jī)化合物的檢測等等。
在水體中的應(yīng)用有在環(huán)境水樣的1 ?-萘酚、2 ，4 ?-二硝基苯酚及其他苯系列化合物的分析，丙溴磷、汽油、醇類、錫、砷、鉛等有機(jī)金屬及其他無機(jī)金屬離子、有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥、除草劑、甲基汞、胺類物質(zhì)、多環(huán)芳烴、羥基化合物以及廢水中烷烴、脂肪烴、醇類、酯類和揮發(fā)性芳香族化合物的檢測等等。
在氣態(tài)樣品中的應(yīng)用有氣體中胺類物質(zhì)、脂肪酸的檢測以及和擴(kuò)散管配合使用，應(yīng)用于揮發(fā)性有機(jī)物（苯、甲基環(huán)己烷、甲苯、四氯乙烯、氯代苯、乙基苯、對二甲苯、苯乙烯、壬烷和異丙苯等）的檢測以及石油烴化合物的檢測。
6.2
固相微萃取技術(shù)：在食品分析中的應(yīng)用
由于固相微萃取法的特點(diǎn)，該技術(shù)剛出現(xiàn)不久，就有人把它應(yīng)用于食品中微量成分的分析，并且在國內(nèi)外都得到了廣泛的發(fā)展。如用于食用醋中有機(jī)揮發(fā)物的分析，白酒中苯酰類芳香族化合物的分析，白酒中敵敵畏含量的檢測，芥末風(fēng)味的檢測，水果中揮發(fā)性芳香族化合物、馬鈴薯中揮發(fā)性有機(jī)酸、薰火腿中的硝基苯胺等芳香族化合物以及向日葵中揮發(fā)性有機(jī)物的檢測等等。
6.3
固相微萃取技術(shù)：在藥物檢測中的應(yīng)用
固相微萃取技術(shù)在藥物分析和藥物檢測上發(fā)展迅速，正逐漸成為生理、病理、毒理學(xué)上不可缺少的一個(gè)檢測手段。如在人體體液中抗組胺類化合物的分析，以及應(yīng)用在血液和尿液中杜冷丁含量的檢測，尿液中一些生物堿以及尿液中二氯苯異構(gòu)體的檢測，血液中氰化物、血清中甾類、酚嗪類和苯酚類化合物的檢測，體液中有機(jī)磷農(nóng)藥以及苯類化合物的檢測，唾液中大麻酚和皮質(zhì)甾類以及人呼吸系統(tǒng)中丙酮成分的檢測等等。
6.4
在其他領(lǐng)域的應(yīng)用
針對固相微萃取法的特點(diǎn)，該技術(shù)應(yīng)用于越來越多的實(shí)際生產(chǎn)和生活領(lǐng)域上，如應(yīng)用于紡織品中殺蟲劑殘留和偶氮染料的檢測、蔬菜中殘余有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測以及在洗發(fā)香波中四氯化碳的檢測，而且在煙草行業(yè)也得到了廣泛的應(yīng)用，如在成品香煙中香料、香精成分的分析、卷煙煙絲中的香氣成分和在煙葉中有機(jī)酸含量的分析。
