外周血單個核細(xì)胞的分類
一、基本原理
外周血單個核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，其比重為1.070左右，而紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞的比重超過1.080。這樣利用介于兩者比重之間的溶液(稱為分層液)做密度梯度離心，就可得到單個核細(xì)胞。最常用的分層液為聚蔗糖和泛影酸鈉混合比重為1.070±0.001的溶液，國內(nèi)常用泛影葡胺代替泛影酸鈉。
二、試劑與器材
1、聚蔗糖—泛影葡胺分層液，Hank’s液，RPMI-1640培養(yǎng)液，肝素。
2、水平離心機(jī)。
三、操作步驟
1、取外周靜脈血，用肝素抗凝，加等量的Hank’s液并混勻。
2、將分層液加入試管中，用量約為血量的1/2。用吸管沿管壁緩緩將血加入分層液面上。
3、置于水平離心機(jī)離心，1500r/min，10min?？梢娊^大多數(shù)單個核細(xì)胞懸浮于血漿和分層液的界面，呈白膜狀。
4、用尖吸管吸取界面的細(xì)胞層，置于另一試管中，加入適量的Hank's液，混勻后以1000r/min，離心10min，棄上清。
5、同法洗滌細(xì)胞2次。
6、將細(xì)胞重懸于RPMI-1640培養(yǎng)液中，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
四、注意事項
1、在分離外周血單個核細(xì)胞過程中，將稀釋血液加于分層液上時，要避免沖散分層液面，而要使之形成良好的界面，否則影響分離結(jié)果。
2、此法操作得當(dāng)，單個核細(xì)胞得率可達(dá)80%-90%，影響得率最重要的因素是分層液的比重。
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