DNA提取方法--洗滌 DNA（或 RNA）
當(dāng)裂解物通過(guò)硅膠膜進(jìn)行離心分離,現(xiàn)在所提取的 DNA 或 RNA 應(yīng)該與柱子結(jié)合,雜質(zhì)、細(xì)胞蛋白和多糖應(yīng)該已經(jīng)通過(guò)了。?
但是,膜仍然被殘留的細(xì)胞蛋白質(zhì)和鹽弄臟。如果樣品來(lái)自植物,仍然會(huì)有多糖,也許一些色素留在膜上,或者如果樣品是血液,膜可能會(huì)被染成棕色或黃色。
洗滌步驟用于去除這些雜質(zhì)。
通常有兩次洗滌,盡管這可能因樣品類(lèi)型而異。第一次洗滌通常會(huì)含有少量的離液鹽,以去除蛋白質(zhì)和有色污染物。這之后總是用乙醇洗滌以除去鹽。
如果開(kāi)始的準(zhǔn)備工作沒(méi)有大量蛋白質(zhì),例如質(zhì)粒準(zhǔn)備或 PCR 清理,則只需要乙醇洗滌。去除離液鹽對(duì)于獲得高產(chǎn)量和高純度的 DNA 或 RNA 至關(guān)重要。一些試劑盒甚至?xí)靡掖记逑粗觾纱巍Ｈ绻麣埩酐}分,核酸的洗脫會(huì)很差,A230讀數(shù)會(huì)很高,導(dǎo)致260/230的比率很低。對(duì)于無(wú)乙醇 DNA 和 RNA,需要進(jìn)行干法離心,乙醇洗滌后,大多數(shù)方案都有一個(gè)離心步驟來(lái)干燥柱子。這是為了去除乙醇,對(duì)于清潔的洗脫液是必不可少的。?當(dāng)將 10 mM Tris 緩沖液或水應(yīng)用于膜進(jìn)行洗脫時(shí),核酸會(huì)水合并從膜中釋放出來(lái)。如果色譜柱上仍有乙醇,則核酸無(wú)法完全再水合。如果跳過(guò)干燥步驟會(huì)導(dǎo)致乙醇污染和低產(chǎn)量。很可能在?Nanodrop 上看不到乙醇吸光度,所以它不會(huì)出現(xiàn)在您的讀數(shù)中。
