提取總RNA，最少需要多少培養(yǎng)的細(xì)胞
用Trizol來提取細(xì)胞總RNA的話，一個(gè)6孔板的細(xì)胞足夠了。對于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，可將培養(yǎng)基吸出后直接向培養(yǎng)板中加入Trizol來溶解細(xì)胞，然后分次移出細(xì)胞裂解物進(jìn)行后續(xù)操作即可。值得注意的是，對于所加Trizol的量，是依據(jù)培養(yǎng)板的面積而不是依據(jù)細(xì)胞的數(shù)量來決定用量的（一般每10cm2加1
ml）。當(dāng)Trizol量不足時(shí)可導(dǎo)致抽提的RNA中污染有DNA。
另外，在Trizol的使用說明中的注意事項(xiàng)提及，如果細(xì)胞量太少（100~10000個(gè)細(xì)胞），可加入800
ul的Trizol，后續(xù)裂解、加氯仿按常規(guī)操作。在用異丙醇沉淀RNA前加入5-10
ug無RNA酶的糖原作為水相的載體。其會保留在水相，與RNA共沉淀，且不影響后續(xù)的逆轉(zhuǎn)錄及PCR反應(yīng)。
推薦
熱點(diǎn)排行
一周推薦
