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PCR反應(yīng)體系的要素介紹

2022.3.09

  其中dNTP、引物、模板DNA、Taq DNA聚合酶以及Mg2+的加量(或濃度)可根據(jù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整,以上表格只提供大致參考值。

  PCR反應(yīng)五要素:參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即:

  引物(PCR引物為DNA片段,細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的引物為一段RNA鏈)、酶、dNTP、模板和緩沖液(其中需要Mg2+)。

  引物有多種設(shè)計(jì)方法,由PCR在實(shí)驗(yàn)中的目的決定,但基本原則相同。PCR所用的酶主要有兩種來源:Taq和Pfu,分別來自兩種不同的噬熱菌。其中Taq擴(kuò)增效率高但易發(fā)生錯(cuò)配。Pfu擴(kuò)增效率弱但有糾錯(cuò)功能。所以實(shí)際使用時(shí)根據(jù)需要必須做不同的選擇。

  模板即擴(kuò)增用的DNA,可以是任何來源,但有兩個(gè)原則,第一純度必須較高,第二濃度不能太高以免抑制

  緩沖液的成分最為復(fù)雜,除水外一般包括四個(gè)有效成分:緩沖體系,一般使用HEPES或MOPS緩沖體系;一價(jià)陽離子,一般采用鉀離子,但在特殊情況下也可使用銨根離子;二價(jià)陽離子,即鎂離子,根據(jù)反應(yīng)體系確定,除特殊情況外不需調(diào)整;輔助成分,常見的有DMSO、甘油等,主要用來保持酶的活性和幫助DNA解除纏繞結(jié)構(gòu)

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